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猪瘟DNA疫苗的临床免疫实验 总被引:1,自引:0,他引:1
在前期研究工作筛选出2种DNA疫苗质粒的基础上,采用3种免疫策略(DNA疫苗单独免疫法、DNA疫苗初免蛋白免疫加强的prime-boost方法以及沙门氏菌(Salmonella)载体介导法),于某规模化猪场对猪瘟病毒(CSFV)的DNA免疫效果进行了临床应用研究。随机选择未经猪瘟疫苗免疫的断奶仔猪60头,分6组进行免疫接种,检测免疫猪抗体产生情况并对各组免疫猪进行攻毒试验。免疫猪血清抗体ELISA检测结果表明,pcDSW组、pIRE2IL2组、pcDSW E2protein组和pIRE2IL2 E2protein组均产生了较高的抗体水平,而沙门氏菌介导的2种DNA疫苗质粒诱导的抗体水平不显著。攻毒试验结果表明,pcDSW和pIRE2IL2单独免疫组或prime-boost组能够抵抗致死剂量的CSFV石门强毒攻击,保护率87.50% ̄90.00%。其中pcDSW效果好于pIRE2IL2。而沙门氏菌介导的DNA疫苗组不能产生有效保护。不同接种途径的免疫效果比较结果表明,颈部肌肉注射免疫后产生的抗体水平较后肢胫前肌注射免疫产生的抗体水平高。 相似文献
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为了解广东省育肥猪群猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)携带情况,2019年在广东省43个生猪屠宰场,采集临床健康生猪淋巴结样品840份,运用商品化荧光定量RT-PCR试剂盒进行PRRSV核酸检测。设计PRRSV ORF5基因引物,选取部分阳性样品进行RT-PCR,测序后进行基因序列分析。结果显示:840份样品的PRRSV阳性率为17.02%,其中美洲型为14.29%,欧洲型为2.73%;成功获得15份样品的ORF5基因序列,其中12株为美洲型,3株为欧洲型;美洲型毒株中包含:JXA1-like毒株5株,GM2-like毒株3株,NADC30-like和VR2332毒株各2株;美洲型毒株基因相似度为87.5%~99.6%,欧洲型为90.2%~90.4%。对美洲型毒株的ORF5基因编码的氨基酸进行分析,发现检测到的不同亚群毒株各个功能区存在广泛的、显著的变异。结果表明,广东省屠宰场猪群的PRRSV隐性带毒率较高,且毒株复杂多样,以美洲型毒株为主,且已存在欧洲型毒株。建议落实并强化规模化猪场生物安全措施,加强流行病学监测,继续推动PRRSV净化工作。 相似文献
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为了解广东省H9亚型禽流感病毒HA基因变异情况,对2017—2018年从广东省活禽市场获得的13株H9亚型禽流感病毒HA基因进行序列分析,发现13个毒株均属于h9.4.2.5分支;潜在的糖基化位点均为8个,主要变异表现在218~220 aa处1个位点缺失和313~315 aa处1个位点增加;受体结合位点主要表现为K149N、A150T、V198T、Q234L和Q235M突变,其中234~236 aa位点突变为LMG,与人源受体相同,具有可感染人的分子特征;抗原性相关位点除201 aa位点较为保守外,其余6个位点主要表现为G90E、S145D、D153G、N167G、A168N、T200R位点的突变,此外168 aa由天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N),并成为主要氨基酸。以上基因突变提示,当前流行毒株的抗原性可能发生了较大变异,现有疫苗株可能对流行毒株不能提供有效的保护,需要研发新的疫苗毒株。 相似文献
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从昆明鼠回肠末端提取总RNA,经逆转录PCR(RT-PCR)扩增出鼠防御素Crp4基因片段。将回收的基因片段插入pMD-18T载体,小提质粒经限制性酶切鉴定后进行测序。结果表明:扩增出的基因片段长度为279 bp。该基因编码93个氨基酸,其中成熟肽由34个氨基酸组成。通过序列分析发现1对引物克隆到2个不同的防御素基因(Crp4-1和Crp4-2)中,与2个鼠防御素基因(AY746426和AY746425)的同源性分别为97.8%和97.1%。在与家鼠、人、猕猴和兔的防御素成熟肽序列进行比较后,发现它们均含有6个保守的半胱氨酸。这一发现有助于对鼠防御素的结构和功能进行深入研究。 相似文献
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中国类禽型H1N1亚型猪流感病毒的发现和遗传分析 总被引:1,自引:0,他引:1
采用禽流感病毒通用引物,对2006年发现的1株H1N1亚型的类禽型猪流感病毒的全基因组进行了测序,并进行了遗传学分析。序列分析表明它的8个片段与欧洲的类禽型猪流感病毒A/swine/Ile et Vilaine/1455/99(H1N1)病毒和A/swine/Cotes d'Armor/1488/99(H1N1)病毒的相应基因具有高度的同源性,同源性可达97%~99%,表明类禽型猪流感病毒已在中国出现。其血凝素基因的190E→D和225G→E的突变使得其结合NeuAc-a2,6Gal受体的能力高于NeuAca2,3Gal受体。欧洲的类禽型猪流感病毒可以直接感染人,并且可导致人的肺炎和死亡。中国类禽型猪流感病毒的发现及其的NeuAca2,6Gal受体结合特性使其成为一个潜在可感染人的病毒。 相似文献
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基于目前在我国人群和动物中流行的狂犬病病毒(RV)均属于基因Ⅰ型,在本室所建立的基因Ⅰ型RV荧光定量RT-PCR方法的基础上,组装了可以便捷使用的RV快速检测试剂盒。对4 577份临床样品的检测结果表明,该试剂盒的检测灵敏度达4.68个TCID50,与《狂犬病防治技术规范》规定的套式RT-PCR灵敏度相当,而且稳定性良好,可以冷冻保存8个月以上。所研制的荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,既适合单个临床样品的确诊,又适合RV流行病学监测的大规模筛查。 相似文献
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本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬病免疫覆盖标准(≥70%)相差甚远;农村地区和狂犬病流行的北方城市,狂犬病免疫覆盖率仍很低,甚至不足5%。以上结果反映出,在未实行强制免疫的情况下,我国狂犬病的免疫覆盖率和经济发展水平呈正相关,欠发达城市和农村地区的犬仍未接受有效免疫,无法阻断狂犬病在动物之间传播,不利于我国狂犬病的控制。 相似文献
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临床健康猪群猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株存在情况调查与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
对华南地区152个规模场和102个个体养殖场/散养户临床健康猪群的2934份血清样品进行PRRSV变异株(NSP2 1594-1680 bp缺失)核酸检测,结果阳性49份,阳性率为1.67%。总计254个场(户)中18个PRRSV变异株核酸阳性,场(户)阳性率为7.09%。其中152个规模场中5个阳性,场阳性率为3.3%;102个个体养殖场/散养户中13个阳性,场(户)阳性率为12.8%。结果表明PRRSV变异株(NSP21594-1680 bp缺失)在华南地区各种类型猪场中都存在,其中在个体养殖场/散养户中存在的几率高于规模猪场。提取来源于1个规模场和2个个体养殖场3份阳性样品核酸进行PRRSV NSP2部分基因序列测定和分析,所获得的氨基酸序列与CH-1a、VR-2332等经典美洲型毒株相比,均在481位缺失1个氨基酸,在532-560位连续缺失29个氨基酸,与2006年以来国内分离的高致病性猪蓝耳病病毒JXA1、HUN4、HPDEBV等具有相同的缺失特性。鉴于PRRSV变异株(NSP2 1594-1680 bp缺失)在生产中已造成很大损失,各养殖生产场必须强化以有效免疫、消毒、生物安全措施为主的综合防控工作。 相似文献
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鼠防御素基因Crp4在大肠杆菌中的表达及活性检测 总被引:1,自引:0,他引:1
通过基因工程技术,以鼠防御素基因Crp4为研究对象,从鼠回肠末端克隆了鼠防御素Crp4基因的成熟编码序列(约为102 bp),将其与另外2个鼠防御素基因的氨基酸序列进行比对,发现同源性分别高达97.8%和97.1%。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a中,构建了重组质粒pET-Crp4,转化DE3感受态并用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Wersiernblot结果表明,该基因在pET-28a中成功表达。体外抑菌试验证实,重组Crp4蛋白对金黄色葡萄球菌、李斯特菌、大肠杆菌等具有一定的抑菌活性。 相似文献