长白猪Plin3、Plin5基因克隆及表达规律研究

脂滴包被蛋白3(Plin3)和脂滴包被蛋白5(Plin5)是细胞内脂滴包被蛋白(PAT)家族的成员,在脂滴合成方面具有重要作用。为探究Plin3和Plin5在长白猪中的序列和表达特征,利用PCR技术扩增该基因,采用生物信息学分析两者的序列特征,并利用实时荧光定量PCR技术检测其在长白猪11个不同组织中的表达特征。结果表明,长白猪Plin3序列全长1 403 bp,Plin5全长1 397 bp,两种蛋白二级结构均以α-螺旋为主,无规则卷曲次之,不存在跨膜结构,无信号肽结构,有多个磷酸化位点。检测两种基因在不同组织中的表达水平发现,Plin3在长白猪的11个组织中均有表达,其中在脾脏中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05),肝脏次之;Plin5在脂肪组织中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05),而在大肠和小肠中不表达。本研究为进一步探究长白猪Plin3和Plin5在脂质代谢中的作用机制提供了理论依据。     

长白猪FGF21基因CDS克隆及禁食后表达规律研究

为研究禁食后长白猪成纤维细胞生长因子21(FGF21)在脂肪沉积中的作用,本文以猪FGF21(登录号:NM_001163410.1)为参照序列,利用PCR技术扩增CDS区域并构建真核表达载体,序列进行生物信息学分析,随后通过实时荧光定量PCR技术检测禁食后FGF21在长白猪11种组织中的表达水平.结果显示:长白猪FGF...     

LPS、poly(i:c)对BV-2小胶质细胞中HMGB1核质穿梭的影响

运用荧光定量PCR方法确定细菌细胞壁的组成成分脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、病毒模拟物聚肌苷酸-聚胞苷酸(poly(i:c))对BV-2小胶质细胞中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)核质穿梭影响的最佳作用质量浓度和时间；免疫荧光方法观察BV-2小胶质细胞活化的特异性标志物IBA-1以此确定LPS、poly(i:c)能否激活BV-2小胶质细胞；Western blot方法检测LPS、poly(i:c)诱导BV-2小胶质细胞中促炎细胞因子(IL-1β、TNF-ɑ、NLRP3和iNOS)的蛋白表达量变化；分离细胞核、细胞质蛋白分别检测细胞质和细胞核组分中的HMGB1。结果显示，终质量浓度为10μg/L LPS、50 ng/L poly(i:c)、刺激时长6 h时能够显著增加促炎因子蛋白表达量；免疫荧光结果显示在LPS、poly(i:c)刺激下，BV-2小胶质细胞激活；核质分离结果显示BV-2小胶质细胞被LPS、poly(i:c)刺激后，HMGB1细胞质移位增加。结果表明，细菌或病毒感染都能够使BV-2小胶质细胞内的HMGB1由细胞核向细胞质移位。