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欧洲葡萄中CIPK基因的克隆及表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以欧洲葡萄‘佳丽酿’(Carinena)为材料,利用RT-PCR方法获得两个CIPK基因的全长cDNA序列,分别为VvCIPK13和VvCIPK14。VvCIPK13全长为1 501 bp,包括一个1 395 bp的ORF,编码465个氨基酸;VvCIPK14全长为1 616 bp,包括一个1 404 bp的ORF,编码468个氨基酸。生物信息学分析表明两个蛋白均含有两个保守结构域:丝氨酸/苏氨酸激酶结构域和NAF结构域,两个结构域之间有连接域,但VvCIPK13和VvCIPK14的同源性较低,仅有40.33%。利用荧光定量PCR技术研究VvCIPK13和VvCIPK14在葡萄不同组织、植物生长调节剂诱导和逆境胁迫下的表达模式,结果表明:VvCIPK13和VvCIPK14表达具有组织特异性,均在卷须中高表达;VvCIPK13对6-BA诱导有响应,而VvCIPK14对6-BA、ABA、IAA、SA、MeJA和GA_3等诱导均有不同程度的响应;VvCIPK13和VvCIPK14均响应高盐和干旱,但不响应低温,其中VvCIPK14的响应最为强烈。推测VvCIPK13和VvCIPK14在葡萄的非生物胁迫过程中发挥重要的作用。 相似文献
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以欧洲葡萄‘粉红亚都蜜’(Vitis vinifera‘Yatomo Rose’)为材料,利用荧光定量PCR技术和转基因技术研究葡萄NAC转录因子DRL1基因对逆境的响应。欧洲葡萄‘粉红亚都蜜’在激素和逆境胁迫下,DRL1表达呈下降趋势,其中以ABA和干旱胁迫处理最为显著。在ABA处理下DRL1转基因烟草株系种子萌发率和根长均高于野生型。干旱处理下,转基因植株对干旱的耐受性降低,同时胁迫相关基因NtLEA5、NtP5CR1、NtPSCS1、NtERD10C和NtDREB3的表达水平比野生型显著下降。此外,DRL1转基因烟草茎中柱发育受到抑制,尤其是导管横切面积仅为野生型的58%。以上结果表明,DRL1基因可能作为1个负向调节子参与植物的干旱胁迫。 相似文献
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以粉红亚都蜜、红巴拉蒂、里扎巴特、新西兰攀金等4种葡萄品种的花粉为试验材料,分别贮藏在-5、-10、-15、-20、-25、-30、-80℃温度条件下,贮藏1、3、5 d,然后用200 g/L蔗糖+50 mg/L硼酸+8 g/L琼脂固体培养基作为营养基质,进行花粉离体培养。结果发现,不同温度处理下贮藏5 d后,红巴拉蒂在-10℃下花粉生活力最高;粉红亚都蜜在-80℃下花粉生活力最高;新西兰攀金在-20℃下花粉生活力最高;里扎巴特在-20℃下花粉生活力最高;不同品种的葡萄花粉量不同,摩尔多瓦的花粉量最多,为11 833±780个。柱头可授性测定试验结果表明,不同葡萄品种柱头可授性强弱不同,摩尔多瓦的柱头可授性最强,适合在杂交育种作母本。 相似文献
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中国野生华东葡萄"白河-35-1"中的芪合成酶基因启动子被证明具有病原菌和胁迫诱导表达活性。现将芪合成酶基因置于增添不同增强子的该启动子下,构建4个植物表达载体,通过农杆菌介导法进行了转化番茄的研究,并对转基因株系抗番茄灰霉病表现及其白藜芦醇含量变化进行了测定。结果表明:经PCR-Southern鉴定,获得转基因株系4个共54株;不同载体转化的番茄株系对灰霉病抗性均高于野生型,但抗性存在差异;添加增强元件enhancer启动子启动的芪合成酶基因表达的番茄株系,可使白藜芦醇含量提高4.4倍。 相似文献
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【目的】从环化的中国华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后的叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因序列。【方法】根据植物抗病基因在氨基酸水平上的保守结构域NBS的P-loop区和LRR设计特异引物,采用三维文库筛选法,对环化的葡萄白粉菌接种诱导后的叶片cDNA文库进行PCR筛选。【结果】共建组池24个,每个组池中含有单菌落768个,包含18432个克隆。从中筛选出具有抗病基因保守序列的阳性克隆585个,其中具有NBS保守序列引物筛选出330个,LRR保守序列引物筛选出255个。对获得的阳性克隆中的插入片段进行了测序,经生物信息学分析去除重复序列后,获得422条具有抗病基因保守结构域的基因序列,其中具有NBS保守序列的250条,具有LRR保守序列的172条,共有NBS和LRR保守序列的25条。【结论】经翻译分析,其中8条编码产物包含NBS的P-loop结构域(GW787739—787742、GW787746、GW787747、GW787749、GW787758),5条编码产物包含LRR结构(GW787743、GW787744、GW787750、GW787751、GW787753),1条华东葡萄特有基因(GW787754)。从中选出具有不同抗病结构域的10条基因进行病源侵染过程中的基因实时定量表达分析,发现其中5条抗病相关基因的表达可被白粉菌接种所诱导,可能与白粉病侵染过程有关。 相似文献
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以欧洲葡萄‘粉红亚都蜜’为材料,利用同源克隆法获得1个NAC转录因子,命名为VvDRL1(GenBank:XP-002281816)。该基因全长840 bp,编码280个氨基酸,与‘黑比诺’葡萄中该基因的同源性为100%,但是基因组DNA序列中存在6处单核苷酸突变。瞬时转化洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分析,VvDRL1基因主要在细胞核内表达,属于核蛋白;通过农杆菌介导的叶盘法获得稳定整合的转基因烟草,T2代转基因植株生长迟缓,株高、叶面积和叶片细胞面积约为野生型烟草的60%、34%和31%,转基因植株叶片出现向内卷曲现象,利用石蜡切片进行显微结构观察,转基因植株主叶脉上表皮下缺失2 ~ 3层厚壁细胞,且海绵组织内的空隙明显多于野生型植株。研究结果表明,VvDRL1在调控植株的形态发育方面起着重要作用。 相似文献
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不同无核葡萄品种花粉贮藏及其生活力的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
以‘京丰无核’‘爱神玫瑰’‘杨格尔’‘奥迪亚无核’和‘奇妙无核’5个葡萄品种的花粉为试验材料,撒播在10%蔗糖+10 mg·L~(-1)硼酸+6 g·L~(-1)琼脂的培养基上进行离体培养,研究不同处理方法(液氮未处理、液氮处理)、不同温度(25、0、-20、-40、-80℃)、不同贮藏时间(1、3、5 d)对5种葡萄花粉生活力的影响。结果表明:‘爱神玫瑰’的单花药花粉量最多,达到(5 446±80)粒;‘京丰无核’的新鲜花粉生活力最高,为(68.19±2.98)%,‘奇妙无核’的新鲜花粉没有萌发。液氮未处理和处理后观察发现,液氮处理后花粉生活力远远低于液氮未处理的,液氮未处理的同一品种不同处理花粉生活力对比发现,最适宜长期贮藏的温度是-80℃,其次是-40℃,25、4、-20℃条件下贮藏花粉生活力降低较快。不同品种花粉贮藏后,‘京丰无核’花粉萌发率最高,为(55.87±1.14)%,较差的是‘杨格尔’,其花粉萌发率比‘京丰无核’花粉萌发率低17.84%,‘奇妙无核’没有萌发,杂交授粉时,适宜的父本为‘京丰无核’‘爱神玫瑰’与‘奥迪亚无核’。 相似文献