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以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原,建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化,确定最佳抗原包被量为每孔1μg(100μL),样品稀释度为1:100,兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1:8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测,以中和试验为参照,经统计学处理,得出检测临界值分别为0.411和0.303,2种方法的符合率分别为72.7%(56/77)和91.4%(85/93)。试剂盒在37℃保存3d,对敏感性无明显影响。 相似文献
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马白细胞介素-18单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
摘要:利用纯化的用原核系统表达的重组马白细胞介素-18成熟蛋白(pET-mEIL-18)抗原免疫BALB/c 小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,同时以昆虫杆状病毒表达系统获得的马白细胞介素-18成熟蛋白(mEIL-18)作为抗原进行间接ELISA检测,筛选并最终得到了9株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株。利用IFA试验对9株单克隆抗体进行鉴定,结果证实所获得的9株细胞分泌的抗体都是针对mEIL-18的特异性抗体。将此9株单克隆抗体分别与用原核系统分段表达的重组马白细胞介素-18成熟蛋白pET-mEIL-18-(1)(mEIL-18 1~78位氨基酸残基)和pET-mEIL-18-(2)(mEIL-18 79~157位氨基酸残基)蛋白进行特异性ELISA检测,结果表明,9株单克隆抗体有5株识别表达的pET-mEIL-18-(1)(mEIL-18 1~78位氨基酸残基),而另外4株单克隆抗体与pET-mEIL-18-(2)(mEIL-18 79~157位氨基酸残基)发生反应,说明所获得的9株单克隆抗体至少针对pET-mEIL-18 2个或2个以上不同的抗原表位。单克隆抗体亚型鉴定试剂盒的鉴定结果显示,除M1F11、M3A11和N7D9为IgM,其余的单克隆抗体均为IgG1,而且所有单克隆抗体的轻链均为?资链。 相似文献
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10亿PIB/mL甜菜夜蛾核型多角体病毒悬浮剂防治甘蓝甜菜夜蛾的田间药效试验结果表明,该药剂对甘蓝甜菜夜蛾具有良好的防治效果.田间每667 m2用量75~100 g时,药后5d对甜菜夜蛾幼虫的防效可达80%以上,药后10 d防效仍高达70%以上,具有极好的持效性.而该药剂对菜田蜘蛛等天敌影响的统计表明,其对蜘蛛种群影响较小,当试验药剂和对照药刺用量为75 g时,药后5d和10d,百株甘蓝上蜘蛛的减退率分别为1.2%和0.5%,显著低于对照药剂3%高效氯氰菊酯·107PIB/mL甜菜夜蛾核型多角体病毒悬浮剂处理区的减退率.说明该药剂具有良好的应用前景. 相似文献
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采用生物和生化测定方法,研究了广州市黄埔区2个荔枝蒂蛀虫田间种群对氯氰菊酯、溴氰菊酯、毒死蜱的敏感性及相关解毒酶活力。生物测定结果表明,茅岗种群(MG)对溴氰菊酯和氯氰菊酯的LC_(50)均比大椿岗种群(CG)显著增加,其敏感性倍数为1、20,二者对毒死蜱的LC_(50)未见显著差异。生化测定结果表明,茅岗种群的多功能氧化酶、细胞色素P450、羧酸酯酶、碱性磷酸酯酶的活力比大椿岗种群显著提高;谷胱甘肽-S转移酶和酸性磷酸酯酶活力未见显著差异。 相似文献
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为获得赤羽病病毒(Akabane Virus, AKAV)囊膜糖蛋白重组抗原作诊断应用研究,通过软件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基酸序列,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经RT-PCR扩增后,插入pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a (+)表达载体中,转化至BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达。经SDS-PAGE和Western-blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为40ku,且具有免疫学活性。亲和纯化后的融合蛋白浓度为2mg/ml,纯度为92.6%。以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为20g/ml,血清最佳稀释度为1:200。交叉试验表明该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应。应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南(77份)和内蒙(70份)牛血清样品进行了检测。以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,本方法的特异性为73%和86.9%,二者的符和率分别为80%和85.9%。 相似文献