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马立克氏病(Marek's disease,MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的一种淋巴细胞增生性肿瘤疾病,病毒的许多成分参与了致肿瘤过程。最近的研究结果发现,MDV编码一种类似于白细胞介素-8的产物,称之为病毒性白介素-8(VIL-8)。这种vIL8与人类IL-8在结构上十分相似,但它对异嗜细胞的趋化作用微弱,而对外周血单核细胞有很好的趋化性,且在MDV溶细胞感染中起重要作用。vIL-8是否能象人类IL-8具有激活单核细胞、增强其吞噬作用、增进毛细血管增生和肿瘤生成等功能尚有待探索,本文就有关vIL-8的作用及作用机制进行了讨论。 相似文献
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为建立一种制备简单、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗原快速检测方法,利用双表达载体pIRES在293A细胞上表达带有His标签和Flag标签的p30重组蛋白,裂解细胞后,通过免疫共沉淀发现p30重组蛋白以聚合体形式存在,进一步用质谱方法对原核系统表达纯化的p30重组蛋白进行分子量测定,结果证实,ASFV p30能自发形成二聚体。在此基础上,用抗p30的单克隆抗体6H9A10建立了单一单克隆抗体夹心检测p30二聚体的胶体金免疫层析方法,该方法对p30重组抗原最低检测浓度为2.1 ng·mL-1,对PRV、CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV、PPV、SVA等抗原检测结果均为阴性;用该胶体金免疫层析方法检测已知的100份临床样品,其中包含20份ASFV阴性血清、20份ASFV阴性组织、10份ASFV阴性血浆、21份ASFV阳性血清、21份ASFV阳性组织、8份ASFV阳性血浆,结果显示,检测出的48份阴性样品和49份阳性样品与已知结果一致。综上,建立的单个单克隆抗体夹心检测p30的胶体金免疫层析方法具有良好的特异性和敏感性,有望用于ASFV抗原的临床快速检测... 相似文献
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为了获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L,将Ba71V株的K205R、E183L、A104R和B602L基因分别亚克隆进行原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET-E183L、pET-B602L、pET-K205R和pET-A104R,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,纯化表达的蛋白,并进行Western blotting鉴定,结果4种重组蛋白与预期大小一致,且与ASFV抗体发生特异性反应。为了从表达的4种重组蛋白中筛选最佳诊断抗原,将其分别包被酶标板,间接ELISA检测ASFV阳性血清,发现重组蛋白pK205R、p54和pB602L血清学反应良好;在检测ASFV感染后第13天分离血清时,重组蛋白p54和pK205R效果更佳,这表明p54和pK205R重组蛋白是较好的诊断抗原,可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。 相似文献
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非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物索标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针.PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进... 相似文献
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用miRNA Target Finder分析软件预测干扰RB1B株马立克氏病病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)gM基因翻译的潜在靶序列,从中筛选出3个作为干扰对象,根据干扰载体pRFPRNAiC特点,设计合成3对单链DNA序列,经PCR反应扩增出双链DNA,并将其插入干扰载体pRFPRNAiC,构建重组干扰质粒pRFPRNAiCgM1、pRFPRNAiCgM2、pRFPRNAiCgM3。将质粒pRFPRNAiCgM1以不同的剂量转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,确定最佳转染质粒量,试验结果表明1μg转染剂量转染效果最佳。以1μg剂量将3种重组干扰质粒分别转染CEF细胞,24h后感染RB1B株MDV,72h后用空斑计数MDV在CEF细胞上增殖数量,以此判定miRNA干扰效果,结果显示,重组干扰质粒中质粒pRFPRNAiCgM2干扰效果较好,能有效抑制MDV在CEF上的生长繁殖。 相似文献
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为了评定无针注射器接种猪瘟活疫苗的免疫效果,将300头非免仔猪随机分为6个组,其中3组用无针注射器分别免疫1头份、1/2头份剂量的瘟倍安以及1头份剂量的STTM猪瘟活疫苗,剩下的3组将无针注射器替换成传统的有针注射器进行免疫。30日龄进行首次免疫,55日龄进行二次免疫,免疫后一周内观察猪有无不良反应。首免后第14天、二免后第25天分别采血、分离血清,ELISA试剂盒检测CSFV抗体,计算每组猪抗体阻断率及免疫合格率,统计分析各组之间的差异。实验结果显示,无针注射器与有针注射器接种疫苗均未对猪精神状态、采食、运动造成影响,无针注射器接种部位炎症发生率也低于有针注射器;无针注射器免疫组抗体滴度明显高于有针注射器接种组,即使疫苗使用剂量减半也能达到很好的免疫效果。 相似文献
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马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因的克隆和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用马立克氏病痛毒(MDV)感染鸡胚成纤维细(CEF),提取总RNA,经RT—PCR扩增出由MDV编码的病毒类白细胞介素-8(vIL-8)基因,并将其克隆进pGEM—Teasy载体中,测序进行分析。将vIL-8基因片段插入表达性载体pGEX-5x-3中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导。结果获得了重组vIL-8-GST融合蛋白的表达。表达产物活性分析表明,vIL-8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性。提示,MDV在致瘤过程中,vIL-8能吸引易感细胞促进病毒感染,并可能参与肿瘤的扩散和发展。 相似文献
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