抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

心肌特异性α-actin启动子重组腺病毒的构建及其鉴定

为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测,并应用蚀斑形成试验测定病毒滴度。结果显示,重组腺病毒中含有α-actin启动子片段,病毒滴度为7×107pfu/mL。表明含心肌α-actin启动子的重组腺病毒pAd-actin构建成功。     

猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的特征分析及其对宿主细胞NF-κB转录活化的影响

猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活化的影响,揭示APPV非典型化的机制。利用SnapGene、ProtParam、PredictProtein、TMHMM、SignaIP 4、ProtScale等在线软件对APPV-YN Mut基因表达蛋白的理化性质、亚细胞定位、磷酸化位点等进行分析预测;将重组载体pCMV-Mut转染至HEK-293细胞,确定蛋白稳定表达后利用TNF-α刺激NF-κB信号通路使其活化,分析APPV-YN Mut对NF-κB转录活性及其对NF-κB P65核质转运的影响。生物信息学分析结果显示,Mut蛋白为亲水性的稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,可能主要定位于细胞质,二级结构主要以无规则卷曲为主,三级结构稳定,可能作用于PKC、P38MAPK、PKA、EGFR、CDK5等相关激酶及蛋白受体;Mut蛋白在HEK-293细胞成功表达,大小约为15 k...     

黄芪多糖对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌作用

采用水提醇治法提取黄芪多糖,并应用琼脂扩散法研究了黄芪多糖对几种奶牛乳房炎主要致病菌的抑制效果。结果表明,10 mg/mL的黄芪多糖对3种细菌都有一定的抑制效果,其中对大肠埃希菌的抑制作用最强,抑菌圈达11.05 mm±0.31 mm,对链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为8.50 mm±0.71 mm和9.32 mm±0.21 mm。3种细菌的最小抑菌浓度不同,对大肠埃希菌的最小抑菌浓度为6.6 mg/mL,而对金黄色葡萄球菌和链球菌则为10.0 mg/mL。     

浅谈铁路工程质量控制管理

介绍枣临铁路工程施工质量控制管理经验总结     

几种方法对奶牛乳房炎的治疗效果观察

乳房炎是奶牛最常见的疾病之一,严重制约着奶牛业的发展。乳房炎可降低奶产量;使奶中的营养成分减少;影响食品卫生;浪费饲料,加重经济损失。本试验选用青、链霉素为基础药,同时分别选用乳肿康,普朗头孢,奶牛三热灵,抗病毒1号等中草药复方制剂采用乳房灌注的方式治疗奶牛乳房炎,每天给药1次,21d为一个疗程。结果表明,中草药复方制剂的治疗效果由于基础治疗组,而且能够明显提高奶产量,本研究为奶牛乳房炎的临床治疗提供资料。     

猪瘟病毒石门株在ST细胞连续传代后E0基因变异分析

为了解猪瘟病毒(CSFV)石门(Shimen)株连续传代后变异情况,根据已发表的CSFV E0基因序列(AF092448.2),设计合成引物,以在ST细胞中连续传代培养的CSFV石门株细胞毒总RNA为模板,每5代通过RT-PCR方法扩增病毒的E0基因,测定其核苷酸序列和氨基酸序列,用DNA Star软件分析比较原代、5代、10代、15代、20代、25代接毒细胞中CSFV E0基因的变异性。结果显示,接种病毒第10代的病毒E0基因在630核苷酸位点出现变异,第15代病毒在632核苷酸位点出现变异。本研究通过分子生物学方法发现CSFV Shimen株在ST细胞连续传代过程中E0基因能保持遗传的稳定性。     

一起猪圆环病毒病的诊治

猪圆环病毒病(PCVD)或猪圆环病毒相关性疾病(PC-VAD)是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引起的一大类猪病的统称。PCVD的临床表现包括种猪的繁殖障碍、哺乳仔猪拉稀、保育猪的多系统衰竭综合征(PMWS)、保育猪与生长肥育猪的皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)     

表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗 在小鼠体内的存留时间分析

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。     

猪繁殖与呼吸综合征并发副猪嗜血杆菌与猪链球菌感染的鉴别诊断和防治

为确定某规模化猪场引发呼吸道症状的病原,继而制定科学的防治方案,对采集的血清和肺脏样品进行常见呼吸道病原的抗体和抗原检测以及细菌的分离和分型鉴定,并对分离菌株进行药敏试验。病毒抗体检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体阳性率为60.0%(45/75),猪圆环病毒2型（PCV2）抗体阳性率为98.67%(74/75),猪瘟（CSFV）抗体阳性率为97.33%(73/75)。病毒核酸检测结果显示,PRRSV阳性率为36.0%(9/25),PCV2和CSFV均为阴性。细菌分离鉴定结果显示,培养的细菌符合副猪嗜血杆菌（HPS）和猪链球菌（SS）的形态特征。病原分型鉴定结果显示：感染病原为高致病性PRRSV(HP-PRRSV)和NADC30-like PRRSV;HPS为血清12型,SS为血清9型。药敏试验结果显示,HPS对多西环素、头孢曲松、头孢噻呋较为敏感,SS对青霉素、头孢曲松、头孢噻呋、头孢氨苄较为敏感。结果表明,该猪场疫情由HPPRRSV和NADC30-like PRRSV毒株及HPS-12型和SS-9型混合感染所致。因该猪场免疫的PRRSV CH-1R经典毒株疫苗与分...