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人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单-/GF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测/GF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%。 相似文献
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安徽省油茶业在政府扶持与农户参与下得到快速发展,但仍存在原料紧张、龙头企业带动效益不足、产品单一、市场开发及抗风险能力弱、基础研究薄弱等问题。只有积极推动油茶产业整合升级,延长油茶加工产业链与推动技术进步,才能推动安徽省油茶产业的快速健康发展。 相似文献
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采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养 ,并且构建了以牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因的真核表达载体。将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞 ,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导。结果表明 ,用 5 mg/ L 催乳素 5 mg/ L 胰岛素 1m g/ L 皮质醇诱导 ,在诱导 36 h后开始有荧光出现 ,诱导 4 8~ 6 0 h时荧光更强一些 ,而未经诱导的细胞 GFP则不表达 相似文献
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