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从家蚕核型多角体病毒中国镇江株 (BmNPV ZJ)基因组DNA中克隆出酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因 (ptp) ,该基因的编码部分由 5 0 7个核苷酸组成 ,其中A为 16 3、C为 99、G为 113、T为 132 ,G +C含量约为 4 2 %。根据其核苷酸序列推演的蛋白质由 16 8个氨基酸残基组成 ,其中含有酪氨酸蛋白磷酸酯酶催化活性区的 11个氨基酸“HC”基序。该基因与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)ptp和BmNPV T3株 (日本 )的ptp核苷酸序列的同源性分别为 96 8%和 98 2 %。BmNPV ZJ酪氨酸蛋白磷酸酯酶 (BmNPV ZJPTPase)的氨基酸全序列与AcMNPV、BmNPV T3、芹菜夜蛾核型多角体病毒 (AfMNPV)PTPase和黄杉毒蛾核型多角体病毒 (OpMNPV)PTPase 1的氨基酸全序列的同源性分别为 97%、97 6 %、96 %和 6 0 % ,而与OpMNPVPTPase 2的同源性仅为 2 0 %。在NCBI数据库中查找BmNPV ZJPTPase的同源性序列 ,查找到的 5 99381个序列中发现至少有 14种mRNA加帽酶其N端部分存在PTPase催化活性区的“HC”基序 ,但其氨基酸全序列的同源性只有 31%~ 32 %。该基因序列已被GenBank数据库收录 ,登录号为AF316 871 相似文献
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人血小板因子Ⅳ在家蚕杆状病毒表达载体系统中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Southern杂交结果表明重组病毒基因组中含有hPF4基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕培养细胞 (2× 10 6个细胞 )和家蚕 5龄幼虫 ,表达产物用体外培养的血管内皮细胞测定其生物活性 ,测得表达量在家蚕培养细胞中第 3天达到最高值为 6 0 88μg/ 2× 10 6个细胞 ;在蚕体内表达第 5天达到最高值 ,表达量明显高于家蚕培养细胞 相似文献
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应用PCR突变的方法 ,在乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)前S2序列的 5’端融合了BmNPV多角体蛋白基因5’端的 12个碱基 ,获得了融合乙肝表面抗原中蛋白基因 (HBMp) ;通过同源重组将其插入到BmNPV基因组多角体启动子后 ,构建了重组杆状病毒BmPAK HBMp。用重组病毒BmPAK HBMp和BmPAK HBM(带有非融合乙肝表面抗原中蛋白基因 )感染家蚕细胞及蛹 ,对两种病毒的表达产物用ELISA进行了跟踪检测 ,结果表明融合蛋白比非融合蛋白HBsAg活性提高了 6 0 %~ 80 % ,作为HBsAg构成部分的PreS2抗原性提高了 8~ 10倍 ;并且HBsAg和PreS2 Ag表达的时相曲线不同 ,PreS2 Ag的表达量比HBsAg早 1~ 2d达到最大值。ELISA检测和Westernblotting分析表明 ,多角体基因序列的存在更有利于中蛋白全基因 (PreS2 +S)的表达。 相似文献
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将人内皮抑素(Endostatin)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,获得重组转移载体pBacPAK-Endo,并与修饰性线性化病毒Bm-BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞,二者在细胞内发生内源重组,经蓝白斑筛选及DNA点杂交,鉴定出含有Endostatin基因的重组病毒BmBac-Endo。将重组病毒感染家蚕培养细胞和五龄幼虫,经SDS-PAGE电泳、Western blotting分析及对人血管内皮细胞株ECV304的抑制活性测定,证明Endostatin在家蚕细胞和幼虫中得到高效表达,且表达产物具有良好的生物学活性。 相似文献
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为进一步研究家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的功能和作用机理,利用RT-PCR技术,从家蚕总RNA中扩增到家蚕SCI-SB基因片段,构建了含有GST标签的融合表达质粒pGEX4T-1-SCI-SB。采用pGEX融合蛋白表达系统,在大肠杆菌BL21中得到以包涵体形式存在的重组GST融合蛋白质,表达量可占菌体蛋白的15%。将包涵体变性、复性处理以后,进一步利用GSTTrapFF亲合层析一步获得了重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰纯种大白兔,获得效价高的多克隆抗体。胰凝乳蛋白酶活性抑制实验结果表明该重组蛋白具有一定的酶活抑制作用。 相似文献
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湖北海棠实时生树阶段转变过程中多胺,RNA/DNA和蛋白质含量的 … 总被引:2,自引:0,他引:2
本试验研究了湖北海棠成年实生树阶段转变过程中叶片内多胺,DNA和RNA含量以及可溶性蛋白质含量的变化。结果表明,随着实生树从童区向成年区的转为,叶片内源多胺总量,腐胺,精胺和尸胺含量下降,至成年区除尸胺外,其余变化趋于平稳;叶片中DNA,可溶性蛋白质含量随叶片着生位置的上升而增加,RNA含量和RNA/DNA值初始逐渐上升,至实生树2m高度位置达到峰值后呈下降趋势,成年区叶片DNA含量和RNA含量均 相似文献
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已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基酸残基,蛋白含有BTB保守结构域和FLYWCH保守结构域,与黑腹果蝇、冈比亚按蚊、赤拟谷盗和埃及伊蚊的MOD多序列比对,其同源性不超过40%。表达、纯化带有His标签的家蚕MOD蛋白(BmMOD),并用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。实时荧光定量PCR显示BmMod基因mRNA转录水平在家蚕蛾期及5龄幼虫的卵巢最高,推测BmMod基因在家蚕生殖腺发育过程中产生一定作用。利用纯化的BmMOD蛋白多克隆抗体进行Western blotting分析也表明该蛋白在家蚕蛾期及5龄幼虫卵巢中的表达量最高,验证了BmMod在家蚕生殖腺发育中的功能。亚细胞定位结果显示BmMOD蛋白几乎完全定位于家蚕卵巢上皮细胞(BmN)的细胞核中。 相似文献
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采用“富集PCR”方法,用单个特异引物和oligo(dT)15从桃伤处理叶片cDNA 中扩增出特异性片段⒚将扩增产物分离并克隆筛选到13 个重组克隆,其中有6 个克隆能与ACC氧化酶基因组DNA 杂交,对其中一个阳性克隆pGEMAC12 作酶切分析,发现其酶切图谱与已报道的桃果实成熟相关的ACC氧化酶cDNA 基本一致⒚DNA 序列分析表明,插入片段两端DNA 序列均是 5'端特异引物序列,表明是由5'端特异引物单个引物扩增出来,全序列分析表明插入片段全长833 bp,是ACC 氧化酶cDNA 基因编码区的一部分,5'端缺少启始密码子ATG,3'端缺少部分编码序列和终止密码子TAA⒚ 相似文献