巨型艾美球虫配子体gam82基因的克隆表达与免疫原性分析

提取巨型艾美球虫(Eimeria maxima)南通株(NT株)配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析.结果表明,克隆的基因全长为1 791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%.根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达.重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53 000.可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在.以 E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性.     

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立及应用

建立一种能够同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重PCR方法,为猪圆环病毒病的快速诊断及流行病学的研究提供技术支持。根据Gen Bank中报道的PCV2和PCV3毒株全基因序列,在建立各病毒单项PCR检测方法的基础上,筛选双重PCR反应的最佳条件。扩增两种病毒的片段分别为1 154 bp和649 bp。建立的PCV2/3双重PCR检测方法的最佳退火温度为55℃,最佳引物终浓度为1. 0pmol/μL。应用建立的双重PCR方法和单项PCR方法分别对73份临床猪病料进行PCV2和PCV3检测,对结果进行对比分析,结果显示两者的符合率为100%。经初步临床应用,所建立的双重PCR检测方法可用于对PCV2和PCV3的同时鉴别检测。     

鸭疫里默杆菌PCR快速检测方法的建立

为了建立一种能快速准确地检测鸭疫里默杆菌的PCR方法,试验采用GenBank中鸭疫里默杆菌42 ku主要外膜蛋白A的基因序列设计并合成1对引物,建立PCR方法,分别以21株来自广西各地区鸭场的鸭疫里默杆菌全菌体为模板,结果均能扩增出大小为660 bp的目的片段,经测序证实为鸭疫里默杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源沙门菌、鸭...     

南宁市某规模化牛场牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌和志贺氏菌混合感染的诊断

<正>牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起,主要表现为腹泻、高热、妊娠母牛流产、死胎及呼吸道等症状,严重者可导致死亡^[1～3]。BVDV以腹泻及整个消化道黏膜糜烂、坏死或溃疡为特征性病变,该病又被称为黏膜病^[4]。BVDV属于黄病毒科中瘟病毒属,单股正链RNA。该病可引起免疫抑制,降低免疫细胞清除血液中病原体的能力和阻碍机体干扰素的形成,进而有助于牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRoV)、大肠杆菌、沙门氏菌等嗜肺性病原体和肠道病原体的混合感染,加重病情,死亡率增高^[4～5]。BVDV感染率低,死亡率高,     

罗非鱼无乳链球菌环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立及应用

针对罗非鱼无乳链球菌Sip基因建立了LAMP检测方法,并对野外样本进行了无乳链球菌的调查研究。结果表明,目标Sip基因可在63℃40 min内被LAMP检测到,比PCR快约2 h,其DNA检测最低浓度为3.55×10~(-5) ng/μL,灵敏度比PCR高100倍,且对参考细菌无扩增。野外样品检测结果表明,运用LAMP检测技术对GBS的检出率为81.3%,比PCR高约20.0%。应用LAMP和PCR分别检测健康罗非鱼GBS检出率4.4%和2.2%,检测池塘水样品GBS检出率分别为10.0%和6.7%。     

巨型艾美球虫株间差异表达基因消减文库的构建和分析

为分离鉴定巨型艾美球虫上海株与南通株间免疫原性的差异表达基因,分别以巨型艾美球虫上海株孢子囊cDNA为驱动组,以南通株孢子囊cDNA为试验组,或相反,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过2轮杂交和2次PCR分别构建了2个抑制性消减文库.随机从2个消减文库中分别挑取96个克隆产物,经PCR鉴定上海株和南通株孢子囊消减文库的重组率分别为91%和94%,差异基因片段大小为250～1 000 bp.从每个文库中随机挑取30个阳性克隆测序,并进行同源性比较分析,结果表明:从上海株cDNA消减文库中获得了19个单一有效序列,其中15个为未知序列;从南通株cDNA消减文库中获得了16个单一有效序列,其中13个为未知序列.这些结果将为分离巨型艾美球虫新功能基因和进一步探索球虫抗原变异相关的分子机理奠定基础.     

广西首例猪圆环病毒3型的发现及其衣壳蛋白序列分析

[目的]明确猪圆环病毒3型(Porcine circovirustype 3,PCV3)在广西猪群中的致病性及流行病学特点,为有效防控其暴发流行提供参考依据.[方法]采用PCR对广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品进行PCV3检测,并对其唯一结构蛋白质(Cap)的结构进行同源模拟,构建遗传进化树;同时在线(http://www.cbs.dtu.dk/services/)预测Cap蛋白信号肽、糖基化位点和B细胞抗原表位.[结果]在广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品中检测到PCV3.PCR扩增产物经核苷酸序列测定分析后截取Cap基因序列(645 bp),命名为PCV3/CN/Guangxi001/2017.PCV3/CN/Guangxi001/2017与13株国内PCV3毒株和5株美国PCV3毒株的Cap基因序列同源性分别在96.9%~99.4%和98.3%~99.5%,属于3b亚群;而与PCV1毒株和PCV2毒株的核苷酸序列同源性只有43.0%和45.8%,且B细胞抗原表位差异明显,在PCV1特有的B细胞抗原表位(92~103 aa)、PCV2特有的B细胞抗原表位(69~83 aa、117~131 aa和231~233 aa)及PCV1、PCV2共有的B细胞抗原表位(156~162 aa和179~192 aa)均无相似性.[结论]广西猪群中已存在PCV3感染,鉴于PCV2与PCV3间无交叉免疫保护特性,实际生产中应通过加强清洁消毒、灭鼠杀虫、定期监测、自繁自养等生物安全措施防控PCV3暴发流行.     

灭蚤项圈对犬、猫蚤的临床试验

采用自身对照试验，以自然感染栉首蚤（Ctenocephalides sp．）的犬与猫为试验动物，验证常熟市金牧药业有限公司生产的灭蚤项圈（犬用、猫用）对蚤的杀灭与防治效果。结果表明：在整个试验期间，所有参与试验的犬、猫均未出现任何不良反应，犬、猫在挂项圈（即用药）后第14～60天，杀虫率分别在97．3％～98．4％与96．6％～98．0％之间，杀虫效果极显著（P〈o．01）。证明灭蚤项圈（犬用、猫用）对犬、猫安全可靠，能长期杀灭犬、猫蚤类。     

复合益生素的制备工艺研究

为了初步筛选出较好的复合益生素制备工艺条件,使益生菌与中药提取物更好的联合应用,试验通过将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌与中药提取物(连翘提取物、双花提取物、黄芪提取物与山豆根提取物)进行体外共培养筛选出对益生菌生长无抑制作用的中药提取物,并用真空冷冻干燥法和低温热干燥法分别制备益生菌粉剂,对两种方法制备的活菌含量差异不显...     

广西2月龄内犊奶牛隐孢子虫感染情况调查

<正>自Tyzzer(1907)首次发现小鼠隐孢子虫(C.muris)以来,国内外学者对隐孢子虫病进行了大量研究,已在人、哺乳动物、禽类、爬行动物和鱼类等多种动物中发现15个种类的隐孢子虫感染[1-3],其中可感染牛的隐孢子虫种为安氏隐孢子虫(C.an-dersoni)、小球隐孢子虫(C.parvum)、牛隐孢子虫(C.bovis)、小鼠隐孢子虫(C.muris)、犬隐孢子虫(C.ca-