丝胶蛋白抗氧化肽的酶法制备及功能评价

为进一步开发利用废蚕丝,充分挖掘丝胶蛋白的可利用程度,该文研究了6种蛋白酶水解制备丝胶肽及产品的抗氧化活性。筛选出Alcalase碱性蛋白酶为制备丝胶抗氧化肽的理想蛋白酶,并以ABTS体系评价了丝胶肽的抗氧化活性。通过单因素试验研究了反应时间、底物浓度、反应温度、pH值、酶底物比对酶水解制备丝胶肽的影响;并通过回归正交旋转试验设计对水解条件进行优化,建立各因素与水解度和抗氧化活性的数学模型,确定Alcalase酶水解丝胶蛋白的最佳水解条件为:反应时间240min,底物浓度2%,反应温度55℃,pH8.5,酶底物比2.375%。最佳水解条件下水解度为33.35%,ABTS清除活性为43.19%。该研究为开发丝胶抗氧化肽功能产品提供了技术依据。     

堆叠pH值对Mozzarella干酪熔化特性的影响

研究了堆叠pH值对Mozzarella干酪熔化性的影响。通过考察不同堆叠pH值Mozzarella干酪贮藏1~7周的熔化性、可冻结水含量、pH值4.6可溶性氮含量、Urea-PAGE电泳,利用共聚焦激光扫描电镜、差示热量扫描仪、流变仪,探讨了堆叠pH值与Mozzarella干酪熔化特性的联系。结果表明,低堆叠pH值的Mozzarella干酪样品可冻结水含量低,结合水含量高,随贮藏期延长（21d以上）蛋白水解片段增多,形成的纤维状结构更加有序,相应的熔化性更好。     

Cdc2相关蛋白激酶PFTK1单克隆抗体的制备

本试验以Cdc2相关蛋白激酶PFTK1的120～141位多肽段与载体蛋白KLH偶联制备人工抗原,免疫Balb/c小鼠,取高免疫效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合,通过有限稀释法最终得到了2株分泌抗PFTK1抗体的杂交瘤细胞,分别命名为4E7和2E3,经鉴定2株抗体均为IgM亚型,轻链均为κ型。经过Western blotting鉴定该抗体能够与PFTK1(1～139肽段)特异性结合。此抗体经过优球蛋白沉淀法纯化后,其纯度达到86.8%。该抗体的制备为研究蛋白激酶PFTK1功能奠定了基础。     

不同载体酶联免疫技术检测牛乳中磺胺类药物的残留

本试验以抗磺胺类药物单克隆抗体为基础,分别建立了以酶标板和金磁微粒为载体的间接竞争酶联免疫吸附测定法,用以检测全脂牛乳中磺胺类药物残留。结果表明,两种方法的检测限均低于0.5ng/mL,对磺胺噻唑、磺胺甲恶唑和磺胺氯哒嗪的交叉率高,与其他抗生素未发现交叉反应;两种方法受全脂牛乳基质的干扰均较小,磺胺噻唑加标回收率为87.0%～95.8%,变异系数为3.9%～9.0%。与传统酶标板相比,金磁微粒提高了牛乳中磺胺类药物检测的灵敏度和精密度,缩短了检测时间。     

响应面法优化短杆菌素的发酵

为了提高短芽孢杆菌Bacillus Brevis(ATCC 8185)发酵液中的短杆菌素产量,采用一系列试验设计法对其发酵培养基及培养条件进行了优化。先用Plackett-Burman设计从8个因子中筛选出对短杆菌素产量有显著影响的因素,再用最陡爬坡试验确定3因素的取值范围,最后使用中央组合设计及响应面方法进一步优化。通过优化过程筛选出的影响因素取值为:酪蛋白胨10.28 g/L,NaCl 4.62 g/L和酵母浸粉11.03 g/L。在此优化培养条件下,发酵液中短杆菌素的质量浓度从优化前的265.32μg/mL提高到594.50μg/mL。     

短芽孢杆菌高产短杆菌素的分段供氧发酵条件优化

本研究通过优化溶氧条件，对短芽孢杆菌（BacillusBrevis）（ATCC8185）进行分段培养，提高发酵液中短杆菌素产量。以析因试验确定菌体生成阶段培养条件为装液量35mL／100mL，摇床转速120r／min；以二次饱和D-最优设计试验确定短杆菌素合成阶段培养条件为：培养36h后静置培养。通过对溶氧条件的优化，发酵液中短杆菌素的产量达到616．93＋9．72μg／mL，比优化前提高了89％。