反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤纽胞中的表达

为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况.试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒...     

植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因（melA）的克隆与序列分析

试验以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增α-半乳糖苷酶基因（melA）基因,PCR产物经纯化回收后克隆至pMD18-T载体中,转化E.coli DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒进行SacⅠ和Sph Ⅰ酶切及PCR扩增鉴定,并对melA基因片段进行序列测定。结果表明,测得的melA基因序列全长2240 bp,含有酶切位点、启动子、SD序列及编码738个氨基酸的开放阅读框,理论分子质量为84 ku;4种核苷酸中GC含量为47.45%、AT含量为52.55%;序列中有3个碱基发生了变化,均为无义突变,未导致其推导的氨基酸的改变;序列测定结果与GenBank中登录的序列进行比较,核苷酸和氨基酸序列的同源性除与AY873840相比分别为96.6%和92.2%外,其余均大于99%。试验成功克隆了melA基因,为进一步构建重组表达载体奠定了基础。     

百草枯引起胎鼠动脉管收缩与内皮素及其受体的关系研究

本文研究了百草枯对胎儿动脉管的毒性作用机理。取妊娠21d大鼠随机分成5组,在不同时间皮下注射25mg/kg百草枯,观察胎儿动脉管收缩情况;取妊娠21d大鼠随机分成4组,试验第1组母体皮下注射25mg/kg百草枯,第2组和第3组胎儿分别注射生理盐水和TAK-044后,母体皮下注射25mg/kg百草枯,观察胎儿动脉管收缩情况;用BQ-123代替TAK-044重复上述操作。结果表明:百草枯对妊娠末期胎儿动脉管具有毒性作用;由百草枯引起的胎儿动脉管收缩与ET有关,且以ETA受体作为媒介参与动脉管收缩。     

乳酸乳球菌同源整合载体的构建及鉴定

构建乳酸乳球菌同源整合载体,实现外源基因在乳酸菌中的同源重组和转入。PCR扩增红霉素抗性基因,连接到T载体中,构建载体pMDE;根据乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472全基因组中usp基因序列设计引物,PCR扩增usp基因两端的同源重组臂LB和RB基因序列,PCR产物经回收后,克隆至pMDE载体中,获得同源重组载体pMDELR,电转化至Lactococcus lactis1.2472感受态细胞中,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。结果表明:成功扩增同源重组臂LB和RB,红霉素抗性基因替换了乳球菌中的usp基因,整合到了乳球菌基因组中。     

乳酸乳球菌高效电转化方法的建立

以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactisNZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明：在固定电阻200Q、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2mm规格的电击杯,加入浓度为1．2μg／μL的质粒,在电场强度和脉）中时间分别为10kV／cm和5ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2h后涂板计数,转化效率最高可以达到2．6×10^4CFU／μgDNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。     

口服疫苗抗原递送载体Lactococcus lactis NZ9000研究进展

综述了基因工程菌Lactococcus lactis NZ9000在基因组学、安全性、功能性、疫苗载体构建、菌株改造等方面的研究进展,对NZ9000作为口服疫苗载体的表达系统进行了评述,展望了其在生物制药、疫苗开发和食品工业等领域的应用前景,并对今后研究的发展方向做了分析。     

除草剂敌草快所致的大鼠胎儿动脉管收缩与肾上腺皮质激素及其受体的关系

研究敌草快所致的大鼠胎儿动脉管收缩与肾上腺皮质激素及其受体的关系。①取妊娠19d大鼠20只，随机分为4组。试验1组未切除肾上腺，2、3组切除两侧肾上腺。1、3组皮下注射7mg／kg敌草使．2组和对照组皮下注射等量生理盐水。取出胎儿，冷冻后观察动脉管收缩情况。②在①里取出胎儿后，从各组母体的腹大动脉中采取血液，测定肾上腺皮质激素浓度。③在①里取出胎儿后，切断头部，收’集血液，测定肾上腺皮质激素的浓度。④取妊娠19、20、21d大鼠各20只，随机分成2组。试验组、对照组分别皮下注射40mg／kg肾上腺皮质激素和等量生理盐水，取出胎儿，冷冻后观察动脉管收缩情况。另用80mg／kg肾上腺皮质激素，重复上述操作。⑤取妊娠21d大鼠20只，收集120只胎儿动脉管，大动脉和母体肝脏，Western blotting法定量其组织液中蛋白质，并与标准肾上腺皮质激素受体蛋白（97000）对照比较。另取妊娠19、20、21d大鼠各20只，收集各自胎儿心脏及心血管系统，通过免疫组织学方法，观察胎儿动脉菅内皮中肾上腺皮质激素受体的分布情况。结果表明，敌草快能促进妊娠末期母鼠分泌大量肾上腺皮质激素；注射肾上腺皮质激素的胎儿动脉管内径明显小于对照组，且引起收缩的临界期为胎龄19～20d；妊娠20、21d胎儿动脉管内皮细胞中存在肾上腺皮质激素受体。由此可见，敌草快能促进肾上腺皮质激素的释放，肾上腺皮质激素对胎儿动脉管具有收缩作用。     

网络直销模式下的农资销售网络设计

随着电子商务的快速发展,农资产品的电子商务越来越多的受到大家的关注。站在农资经销企业的角度,从农资连锁经营模式出发,探寻农资连锁经营模式发展过程中存在的问题,引入电子商务这一网络直销模式,将农资连锁经营与电子商务进行整合,实现线上线下结合,虚拟网络与实体网络的结合,构建了网络直销模式下的农资销售流通网络,剖析了农资销售网络的结构和运行机制,将网络节点分为顶层节点、中间节点和末端节点三类,说明了各节点间订货与配送流程和方式。网络直销模式下的农资销售网络融入了电子商务元素,有助于农资及农产品物流的发展。     

二吡啶除草剂敌草快与肾上腺皮质激素引起胎鼠动脉管收缩的作用研究

本文研究了敌草快和肾上腺皮质激素对胎鼠动脉管的收缩作用。取妊娠19、20、21 d的大鼠,各随机分成2组。试验组皮下注射7 mg/kg敌草快,观察胎鼠动脉管收缩情况;取妊娠19 d大鼠,随机分成4组,试验1组未切除肾上腺,2、3组切除肾上腺。1、3组皮下注射7 mg/kg敌草快,第2组和对照组注射生理盐水,观察胎鼠动脉管收缩情况,并且测定母鼠血浆中肾上腺皮质激素的浓度;取妊娠19、20、21 d大鼠,各随机分成2组,试验组皮下注射40 mg/kg肾上腺皮质激素,观察胎鼠动脉管收缩情况,另用80 mg/kg肾上腺皮质激素,重复上述操作。结果表明:敌草快和肾上腺皮质激素对妊娠末期胎鼠动脉管具有收缩作用,且引起收缩的临界期均在胎龄19￣20 d。     

利用响应面分析法优化鼠李糖乳杆菌产胞外多糖的发酵工艺

首先利用Plackett—Burman法筛选出影响鼠李糖乳杆菌胞外多糖产量的三个重要因素,分别为培养温度、酵母粉、接种量,再用最陡爬坡试验逼近产胞外多糖的最大响应区域,最后运用Box—Behnken中心组合方法进行三因素三水平试验,以胞外多糖产量为响应值建立回归模型,采用响应面分析法确定最优工艺参数。结果表明：当温度为29．7℃、酵母粉30．45g／L、接种量5．76％时胞外多糖产量最大,为354．97mg／L。