响应面法优化海南野牡丹属植物DNA的提取条件

为研究不同环境中的野牡丹是否为同一生态型,分析海南野牡丹的种间关系。本研究建立、优化了海南省野牡丹属植物DNA提取条件,利用DX8Trial软件分别对CTAB浓度、PVP浓度、β-巯基乙醇浓度、醋酸钠用量等因素进行改良设计。结果表明,最佳提取条件为:2%CTAB、2%PVP、1%β-巯基乙醇、5 mol/L醋酸钠90μL;同时,采用该条件提取野牡丹属其它植物DNA,结果 DNA纯度较高,条带清晰,提取效果好。最终该提取条件适用于海南产野牡丹属植物DNA的提取,为该属植物遗传多样性研究及分子生物学研究提供依据。     

文冠果DNA提取及RAPD反应体系的优化

以山西省20个县的文冠果为材料,采用改良的CTAB法提取文冠果基因组DNA,并对文冠果RAPD分析的最佳反应体系进行优化。结果表明,文冠果RAPD分析的最适反应体系为:PCR扩增的总体积为20μL,包括30ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,0.1mmol.L-1dNTP,Taq酶1U,不足的体积用超纯水补足。扩增程序为:94℃预变性120s,94℃变性30s,36.9℃退火45s,72℃延伸90s,45个循环后在72℃延伸300s,结束后在4℃条件下保存。在此最佳反应条件下,RAPD分析具有良好的稳定性和可重复性。