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[目的]构建马铃薯X病毒复制酶基因(RdRp)的载体,并将其在烟草中转化。[方法]将RdRp基因分为3个片段,分别连入表达载体中,其中基因5'端和3'端序列通过PCR方法获得,中间序列通过酶切从病毒载体pGR107上获得。最后将构建成功的载体转入烟草中进行表达。[结果]表达载体pK1390+RdRp被成功构建;获得PCR初步鉴定为转基因的植株50多棵。[结论]为研究植物病毒机制提供了依据,也为利用杂交手段得到外源蛋白高效表达的双转基因植物奠定了基础。 相似文献
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烟草丛顶病由烟草丛顶病毒、烟草脉扭病毒、烟草脉扭病毒伴随RNA和烟草丛顶病卫星RNA复合侵染引起的毁灭性病害,为了构建这四种病毒的干扰载体,培育抗病毒烟苗,本研究首先利用PCR扩增、酶切、克隆、连接转化和胶纯化技术分别得到携带酶切序列约200 bp的四种病毒目的片段;其次,用目的片段与携带有对应酶切序列的pENTR?2B入门载体连接、检测和纯化得到携带有目的片段的入门重组载体pENTR?2B-Vims;最后,用入门重组载体与表达载体PK7GW1GW2进行LR反应,经PCR检测得到正确干扰重组载体后,再用叶盘法将目的基因转入烟草叶片中,进一步用组培技术培育组培苗。本研究为解决目前烟草丛顶病防治难题,提供烟草生产发展技术思路和理论依据。 相似文献
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土壤内的硫同氮、磷、钾一样,是植物生长发育所必需的,很多化合物中都含有它,在植物的新陈代谢中起着重要作用。一些不可代替的氨基酸(蛋氨酸、胱氨酸和半胱氨酸)以及这些物质的中间化合物都属于含硫化合 相似文献
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