禽大肠杆菌外膜蛋白基因C(ompC)的序列分析

根据 Gen Bank中人源大肠杆菌 K- 12外膜蛋白基因 C(omp C)的核苷酸序列设计引物 ,应用 PCR方法从禽大肠杆菌 O2 、O78株及它们的融合双价弱毒菌株 O2 ,78(Norr Chlr)中分别扩增得到 omp C基因 ,序列测定及分析比较发现 ,3个菌株的 om p C基因均由 170 2 nt组成 ,核苷酸序列完全相同 ,只有 1个大的开放性阅读框 (ORF) ,长 10 92 bp,编码由 36 3个氨基酸组成的前 Om p C蛋白 ,前 2 1个氨基酸残基组成信号肽 ,成熟的 Omp C蛋白由 342个氨基酸残基组成 ,Mr为 4 0 0 0 0。其氨基酸序列也完全相同。从基因水平上证明了禽大肠杆菌 O2 、O78株及融合双价弱毒菌株 O2 ,78(NorrChlr)存在相同的外膜蛋白 C抗原 ,从而为进一步研究 Omp C蛋白的免疫原性奠定了基础     

观念先进制度规范——考察香港、澳门警犬训练队有感

一、训练观念和方法的差异。香港警犬训练队主张从犬出生3周后开始训练，主要是带犬熟悉环境，培养犬的工作欲望，规范犬的行为。这部分工作，我们通常称之为“幼训”，实践证明，经专业培训的人员进行“幼训“能有效提高犬的整体素质。     

鸡大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

采集河南某地养鸡场临床疑似患大肠杆菌病的死鸡的肝脏、脾脏和淋巴结,对分离的细菌进行显微镜检查、细菌生化试验、大肠杆菌O抗原血清型鉴定和PCR检测,分离鉴定结果为大肠杆菌感染.药敏试验结果表明,分离菌株对氟苯尼考、头孢拉定和环丙沙星高度敏感;对头孢唑啉、恩诺沙星、呋喃妥因、阿米卡星、磺胺嘧啶、和林可霉素中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、红霉素、氟哌酸、氯霉素、四环素、链霉素、痢特灵、卡那霉索、麦迪霉素等均有耐药性,说明大肠杆菌耐药性普遍存在,建议临床上治疗鸡大肠杆菌病时应先做药敏试验,以筛选出对相应大肠杆菌菌株敏感的药物.     

地方品种固始鸭γ-干扰素基因的克隆与分子进化分析

根据GenBank发表的鸭γ-干扰素cDNA基因序列,自行设计、合成1对引物,应用RT-PCR技术,无需用非特异性免疫原如ConA、PHA等刺激分离的脾淋巴细胞,直接提取总RNA,扩增固始鸭γ-干扰素基因(DuIFN-γ),并进行克隆和测序。测序结果表明,获得了DuIFN-γ全序列,其大小为515 bp,包含一个完整阅读框,编码164个氨基酸残基,推导的氨基酸有3个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。序列比较分析发现,克隆的固始鸭IFN-γ基因序列与GenBank中4条鸭IFN-γ基因序列中的3条序列(AF087134,AF100929,AJ012254)完全一致,而与另一条北京鸭核苷酸同源性为99.6%,有2个碱基发生非同义变异,氨基酸同源性为98.8%。固始鸭与人和其他种动物的IFN-γ基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-γ基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。DuIFN-γ基因的成功克隆为进一步研究固始鸭IFN-γ基因表达、生物学活性和应用奠定基础。     

HIV VRC01单链抗体的构建、原核表达及纯化

【目的】合成、克隆HIV单克降抗体VRC01的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。【方法】根据GenBank上公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列合成引物,运用基因从头合成和重叠延伸PCR方法,克隆抗体VRC01的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因;用15肽Linker(Gly4Ser)3将VH和VL基因相连,得到单链抗体基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,并分别将两者克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒后转入大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;将重组蛋白进行变性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行初步纯化。【结果】得到了VRC01的2种单链抗体的基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,其大小分别为770和768bp。SDS-PAGE电泳结果显示,scFv-VH-Linker-VL在大肠杆菌中不表达或表达量极低;而scFv-VL-Linker-VH表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,且主要以包涵体形式存在。Western blot检测结果证实,scFv-VL-Linker-VH可与His-Tag融合表达,并通过亲和层析法成功纯化获得了该单链抗体。【结论】成功构建、表达并纯化出了VRC01单链抗体,为进一步研究VRC01单链抗体的生物学特性奠定了基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒PCR快速检测方法的建立

根据GenBank发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列(EF552578),设计合成了1对特异性引物,通过优化反应条件,成功地从ILTV疫苗株中扩增出329 bp特异性片段,而传染性支气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。回收的PCR产物经EcoRⅠ酶切和测序鉴定,证实了该扩增片段的特异性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为30 pg。经临床初步应用表明,该方法的建立使传染性喉气管炎病毒的检测更为快速、简便、经济和实用。     

猪流行性腹泻病毒和猪圆环病毒3型双重PCR检测方法的建立

为建立同时快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重PCR方法。本研究根据GenBank中登录的PEDV和PCV3基因组序列,分别在M基因和Rep基因高度同源保守区设计2对特异性引物,建立了检测PEDV和PCV3双重PCR方法,即可同时扩增225bp(PEDV)和138bp(PCV3)2条特异性片段,而该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪博卡病毒、猪圆环病毒2型、大肠杆菌核酸扩增均为阴性;PEDV和PCV3的最低检出量分别为428和325拷贝/μL,且特异性强、敏感性好,为快速、高效检测PEDV和PCV3提供了技术帮助。     

人血栓调节蛋白基因的表达及转基因小鼠的建立

用PCR方法从人的基因组DNA中扩增了人血栓调节蛋白（hTM)基因，将其克隆到带有人EF－1α启动子的pEF-neo哺乳动物表达载体上，得到表达质粒pEF-TM。在转染pEF-TM的COS－1细胞中，hTM得到了瞬时表达，并且正确地定位到细胞膜上。用pEF-TM转染猪内皮细胞（PEC），经G418筛先得到稳定转染的克隆。凝血活性测定结果显示，表达hTM的PEC凝血时间明显延长，表明其抗凝血能力增强。通过显微注射方法，得到了1只F0代hTM转基因小鼠。Southern杂交结果表明，该转基因小鼠整合了9个拷贝的pEF-TM DNA,并能将外源DNA遗传给后代。     

猪伪狂犬病疫苗的研究进展

猪伪狂犬病是由猪疱疹病毒I引起的一种急性高度接触性传染病,可造成不同阶段的猪发病,且一旦发病很难根除,给养猪业造成了严重的经济损失。目前,疫苗免疫接种是预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一。早期的疫苗主要是灭活疫苗和弱毒活疫苗。随着生物学技术的发展,PR基因缺失疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和重组疫苗等新型疫苗也随之诞生。本文对猪伪狂犬病疫苗的研究作一综述,为该病的有效防控提供了有益参考。     

鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(H9N2)三联灭活疫苗的安全性研究

为证实鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(新支流)三联灭活油乳疫苗的安全性,通过颈部皮下注射接种14日龄来航鸡,每日测定鸡的体重,连续监测28 d,用t检验分析对照组和免疫组体重之间的差异显著性。试验结果表明,免疫接种组和空白对照组体重差异不显著,所制备的新支流三联疫苗不影响鸡的生长性能,对鸡安全。