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【目的】γ-谷氨酰磷酸还原酶是真菌脯氨酸合成途径中的一个关键性酶,本研究旨在对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)γ-谷氨酰磷酸还原酶编码基因SsGPR1进行沉默,并对沉默转化子菌丝生长、菌核形成和致病力等表型进行研究,为揭示核盘菌的生长发育与致病机理打下基础,并为作物菌核病的绿色防控提供线索。【方法】通过BLAST进行蛋白同源比对分析,并利用MEGA 5.0软件构建蛋白进化树。通过实时荧光RT-PCR检测SsGPR1在核盘菌菌丝生长、菌核发育和萌发的各个阶段以及致病不同时期的表达模式。根据RNA干扰原理构建SsGPR1的沉默载体,通过PEG介导原生质体转化的方法将沉默载体转入到野生型核盘菌菌株1980中。利用实时荧光RT-PCR鉴定基因沉默转化子,对沉默转化子的菌丝形态、生长速度和菌核形成等表型进行观察,并测定沉默转化子在氧化胁迫条件下的菌丝生长。将沉默转化子分别接种至活体油菜叶片和拟南芥植株,观察并测量病斑大小。通过酸性茚三酮法对沉默转化子中的游离脯氨酸进行测定。【结果】核盘菌SsGPR1全长1 454 bp,编码449个氨基酸,在氨基酸H~(10)-N~(426)处含有谷氨酰磷酸还原酶结构域。同源比对发现SsGPR1蛋白与灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的BC1G_13183蛋白和白霉病菌(Sclerotinia borealis)的SBOR_2215蛋白相似性最高,氨基酸序列一致性分别达95%和94%,系统进化树结果表明三者聚为一个小的分支。SsGPR1在核盘菌菌丝生长时期的表达量较高,在菌核不同发育阶段表达量相近,但均低于菌丝生长时期。SsGPR1在致病时期表达量不断升高,在接种后9 h表达量最高。将SsGPR1基因沉默载体pSIGPR1导入到核盘菌野生型菌株中,并通过实时荧光RT-PCR检测不同转化子中SsGPR1的表达水平,结果表明SiGPR1-104和SiGPR1-149为SsGPR1基因沉默转化子。沉默转化子在PDA培养基上形成的菌核数量及均重与野生型菌株无显著性差异,且菌核均能萌发形成子囊盘,但菌丝生长稠密,生长速度显著下降。在含有H_2O_2的培养基中,SsGPR1基因沉默转化子菌丝生长受到更强的抑制,表明沉默转化子对氧化胁迫更加敏感。SsGPR1基因沉默转化子在活体油菜叶片和拟南芥植株上能引起发病,但病斑面积减小,表明沉默转化子致病力减弱。SsGPR1基因沉默转化子菌丝中的游离脯氨酸含量与野生型菌株相比无显著差异。【结论】SsGPR1与核盘菌的生长和菌丝形态相关,且参与核盘菌对氧化胁迫的抵御及致病过程。 相似文献
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贵州省六盘水市马铃薯癌肿病综合防治技术 总被引:1,自引:0,他引:1
马铃薯是六盘水市的主要粮食作物,近几年来播种面积逐年扩大,播种面积已达5万hm2,其产量位居第三位。马铃薯癌肿病的发生和扩展蔓延,给六盘水市马铃薯生产带来严重威胁,已引起了各级政府的高度重视。从1998年起,对该病害进行了发生和防治研究,并取得一定成效,2004年发生面积已下降到85hm2。1病害分布及危害马铃薯癌肿病主要发生在冷凉潮湿的山区,在国内已知四川省、云南省和贵州省有发生。其中四川省分布在凉山、甘孜、雅安、乐山等市(州)的17个县;云南省分布在昭通市的5个县;贵州省分布在毕节市的赫章县、威宁县和六盘水市的钟山区大湾镇。… 相似文献
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为了深入研究抗生菌假单胞菌20#-5菌株的有关性状,采用固体平板抑菌法调查了其代谢产物的抗菌谱,用甲醇浸提和色谱分离法对其活性成分进行了分离纯化,并初步优化了其发酵条件。结果表明,该菌的代谢产物在固体培养基上对马铃薯晚疫病菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌等有较强的抑制作用,抑菌直径大于20mm;对耶尔森氏菌有微弱的抑制作用,抑菌直径小于10mm;对小麦赤霉病菌、柑橘溃疡病菌、亚利桑那沙门氏菌、克雷伯氏菌等没有抑制作用。浓缩液经AcA202凝胶过滤和C-18反相色谱分离,结果显示该菌代谢产物中有多种抗菌活性成分。该菌株的最佳发酵条件是100ml的三角瓶中装10ml初始pH8.0的LB培养液,28℃摇床发酵4天。 相似文献
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重庆地区马铃薯晚疫病菌(Phytophthora in festans)对甲霜灵抗性及抗性水平测定 总被引:12,自引:3,他引:12
20 0 1年从北碚、云阳、开县、万州、巫溪和忠县等地采集马铃薯晚疫病病叶 ,共分离得 94株致病疫霉。用生长速率法测定其对甲霜灵的抗性和抗性水平 ,结果表明 :2 0 2 %的菌株表现为抗性 ,11 7%的菌株表现为中抗 ,6 8 1%的菌株表现为敏感 ;以菌株PBB 110 2为敏感对照 ,所测定的 2株抗性菌株的抗性水平达 10 6倍以上 ,各地菌株抗性表现与菌株来源地的施药水平密切相关 ,并对抗药性不同的地区提出了不同的用药策略 相似文献
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