双孢蘑菇液氮保藏菌株的遗传稳定性分析

双孢蘑菇As2796、As3003、As4607、As4580等4个菌株经4年的液氮保藏,菌种解冻后进行成活率的测定,恢复生长的菌种在粪草培养基上进行不同温度、不同含水量及不同酸碱度的走菌试验,同时进行纤维素酶活力的测定、同工酶谱检测、RAPD检测及出菇栽培等试验。试验结果表明：双孢蘑菇菌种在液氮中经过4年的保藏,液氮保藏菌种的菌丝生长速度、纤维素酶活力与对照菌株相同,同工酶电泳酶谱和RAPD扩增条带保持不变,栽培出菇仍保持着原有的生长特性与产质量性状,液氮保藏方法可以长期保持双孢蘑菇菌种的稳定性。     

农杆菌介导的双孢蘑菇菌丝转化技术探讨

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)As2796液体培养菌丝为农杆菌转化受体,经潮霉素抗性平板筛选,共获得17个阳性转化子,对转化子进行外源插入基因的PCR扩增验证。研究结果表明:以液体培养菌丝为受体的农杆菌转化效率为8%～10%,相比菌褶作为转化受体效率低,但该方法周期短,且能满足实验室的日常转化需求。     

双孢蘑菇颜色基因分子标记的初步筛选

以4个白色和4个棕色双孢蘑菇(Agaricus bisporus)菌株,对其500个随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)随机引物进行筛选,筛选出的S33、S438、S485 3个引物在棕色菌株组能扩增出4个特异条带(大小300~2000bp),将特异片段回收,克隆测序,将合成的4对特征序列扩增区域(sequence characterized amplified regions,SCAR)标记引物对48个菌株进行验证,结果表明:仅SCAR41200在24个棕色菌株的22个中能扩增出特异条带,而所有白色菌株中都没有此条带,表明该标记与棕色菌株的棕色基因相关。     

双孢蘑菇不同交配型同核不育单孢的基因组文库构建

对24个双孢蘑菇不育单孢进行两两杂交配对,以菌株9608为基准,获得了2种不同交配型的不育单孢菌株A+:9601、9608、9609、9612、AgQG841-1、AgLH830-4、AgLH830-6、AgQL8125-5;A-:9602、9603、9604、9607、Ag2k811-1、M7206-1、M7206-2、M7206-11、M7206-13。将这2种菌株进行DNA提取,并构建DNA文库,对文库进行酶切验证,用SalⅠ酶切,可切出20、14、9kb等3个片段,其中20、9kb为λ载体的左右臂,插入片段为14kb,与预期相符,说明文库的质量较高。     

双孢蘑菇菌种液氮保种方法的研究

主要进行双孢蘑菇菌种液氮保藏中菌丝的培养基质、不同冷冻保护剂、不同降温速率及菌种解冻方式等因素对菌种活力的影响研究。结果表明生长3d-5d菌龄的PDA菌丝块,以10％甘油作为冷冻保护剂及聚丙烯吸管安瓿为容器,制备的菌种保藏管在液氮罐口缓慢降温至-40％左右时,迅速浸入液氮保藏,提取的液氮保藏菌种以快速解冻方式进行复苏,双孢蘑菇菌种经过4年的液氮保藏,存活率达100％,栽培出菇的农艺性状仍保持原有菌株特性,研究建立的双孢蘑菇液氮保藏方法已成为我所蘑菇菌种长期保藏的主要方法之一。     

无孢平菇PK01菌株的培养特性及营养成分评价

研究和分析了无孢平菇的培养特性、显微结构及主要营养成分,研究结果表明,无孢平菇茵丝生长的适宜温度为25℃～30℃,子实体生长发育发生的适宜温度为18℃～22℃。扫描电镜观察子实层,无担孢子。营养成分分析表明,无孢平菇子实体的粗蛋白20．3％、粗纤维7．3％、粗脂肪2．6％、可溶性总糖5．9％、总氨基酸13．88％,其中必需氨基酸占总氨基酸的36．2％。     

双孢蘑菇栽培菌株遗传多样性的DNA指纹分析

对206个收集自世界各地的双孢蘑菇栽培茵株的总DNA进行大规模的SRAP、ISSR和RAPD分析.共获得15条SRAP、3条ISSR和2条RAPD特异性标记条带.利用这20个标记条带206个茵株进行统计和聚类分析,获得亲缘关系树状图.结果显示在28%的相似值上,206个菌株可以分为高产型和优质型两大类群.其中,优质类群主要包含优质传统菌株(代表菌株8213、8211)和优质杂交菌株(代表茵株为福建省蘑菇菌种研究推广站选育的As2796、As4607)两大类,高产类群也主要包含高产传统茵株(代表菌株01、02)和高产杂交菌株(代表茵株为荷兰选育的U1、U3)两大类.而在100%相似值上,可分为大小72个类群,每群包含菌株数为1-31不等.     

双孢蘑菇栽培菌株遗传多样性的DNA指纹分析

对双孢蘑菇206个栽培菌株的总DNA进行大规模的SRAP、ISSR和RAPD分析,共获得15条SRAP、3条ISSR和2条RAPD标记。利用这20个标记对206个菌株进行聚类分析,获得亲缘关系树状图。结果显示在28%的相似值上,206个菌株可以分为高产型和优质型两大类群,而在100%相似值上,可分为大小72个类群,每群包含菌株数为1~31不等。     

双孢蘑菇mtDNA粗提物的酶切分析

发展了一种粗提双孢蘑菇mtDNA的方法，获得As2796亲代及子代系列菌株的mtDNA粗提物，用HaeⅢ、CfoI、MspⅠ、TaqⅠ等内切酶进行酶切，并对酶切结果进行了分析和讨论。