高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4（Nonstructural protein 4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21（DE3）,诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Westernblot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析（Ni-NTA）纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB／c小鼠,抗血清ELISA效价达1：16000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。     

乙型脑炎病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定

为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白I,II结构域抗原表位,本研究设计了一系列针对E蛋白的I、II结构域(1aa～296aa)部分重叠短肽,分别进行GST融合表达,用JEV阳性血清进行western blot和ELISA反应性筛选,获得了5个线性抗原表位分别为:E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS16)、E10-4(77TGEAHNEK84)、E11-2(83EKRADSS YVCKQ94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG160)和E33(257SQEGGLHHALAGAIVV272)。除E10和E19外,其它表位均为第一次通过实验方法确定的。将这5个融合蛋白对小鼠进行免疫,获得了高滴度的针对5个融合短肽的抗血清,研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。     

新鲜! 在室内种草坪

人们大部分时间是在家庭居室、办公室、公共建筑等室内环境中度过的,但传统的地毯容易释放甲醛等有害致癌物质。草坪在当前的城市绿化、美化以及休闲和运动场地的建设中起着重要的作     

实用技术

花前花后有雨水或田间潮湿的葡萄园，花序分离期可以施用40%嘧霉胺1000倍液+78%科博800倍液，开花前，再用70%甲基硫菌灵800倍液+80%喷克800倍液。如果是巨峰系品种，穗轴褐枯病较重，可换成花序分离期50%多菌灵·乙霉威600倍液+78%科博800倍液，开花前70%甲基硫菌灵800倍液+80%喷克800倍液。如果这两次药没用好，花期出现烂花序情况，尽可能选择晴天的午后用药，以97%抑霉唑4000倍液+40%嘧霉胺1200倍液或40%嘧霉胺1200倍液+70%甲基硫菌灵800倍液喷花序，80%落花后再加强友霉病的防治。     

野狍驯管要点

野狍俗称狍子,学名矮鹿,属双蹄目鹿科动物,现为国家野生保护动物.因其全身无肥膘肉质纯瘦、享有"瘦肉王"之美称,肉质细嫩鲜美、营养丰富为高级野味佳肴,同时也是高效创汇产品.因此,掌握野狍的饲养及繁殖技术,不仅有利于保护野生资源,也为我国广大养殖户探索出一条新的致富之路. 1 建圈舍 狍圈一般建在庭院内向阳、通风处,做到冬暖夏凉.圈舍由运动场和卧室组成.运动场为敞棚结构,外围墙高2m以上,为防逃跑,墙头可压盖柴草.总体要求每对狍圈舍面积不低于5平方米,圈内设喂食槽和饮水槽.野狍冬季不怕冷但夏季怕热,因此夏季要有遮阳设施.     

齐市地产药材的体外抑菌试验

1材料 1.1药物 蒲公英、松针、野菊花、苦参、大蒜、黄芩、黄连、黄柏、牛蛭、知母、白头翁、秦皮、防风、山豆根、马齿苋、仙鹤草、车前子、龙胆草、党参、黄芪均购自齐齐哈尔市中医院.     

夏季蛋鸡的高产饲养管理

1适当增加饲料营养浓度生产实践证明,在夏季高温期间饲料中添加1.5%的熟豆油,其产蛋率可显著提高。此时谷物类饲料如玉米的用量一般为50%~55%。2酌情增加蛋白饲料供应夏季天热,鸡采食量减少,只有适量增加饲料中的蛋白质水平,并保证氨基酸平衡,才能满足蛋鸡对蛋白质的需要。产蛋鸡饲料中蛋白质的含量应比其他季节提高1~2个百分点,达到18%以上。增加配合饲料中豆粕、棉仁饼等     

欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立

为了构建猪流感病毒A/swine/Tian Jin/6/2013(H1N1)的反向遗传操作技术平台,通过RT-PCR技术分别扩增了欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒的8个基因片段,并分别连接至双向转录表达载体p BD上。纯化8个重组质粒,共转染到293T细胞。54 h后收集上清,并接种到MDCK细胞。待细胞病变明显时,进行血凝试验检测收集到的上清,测得血凝效价为1∶32。测定拯救病毒的全基因组序列,结果显示,在核苷酸序列上,拯救病毒与野生病毒完全一致。细胞病变情况显示,拯救毒株与野生毒株无明显差别。本研究成功拯救了欧洲类禽H1 N1亚型猪流感病毒,为猪流感病毒的致病机理、基因功能研究以及H1N1亚型猪流感病毒新型疫苗的研发奠定了基础。     

草甘磷除草效果的试验

西江林场自1990年和1991年在幼林抚育、防火线、林道、果园、更新造林地上进行了化学除草试验,并取得了显著的经济效益。在此基础上西江林场又采用41％和10％草甘磷进行了大面积推广应用试验。实践证明,两种不同剂型的草甘磷的除草效果都比较理想,但由于41％草甘磷属于异丙胺盐之N-(磷酰甲基)甘氨酸水剂,其制剂稳定、使用更方便、效果更好,故在生产上开始大量采用41％草甘磷。