家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

重组猪抑制素蛋白质中毒素残留检测及其理化稳定性

为探索纯化的重组猪抑制素蛋白质毒素残留情况以及重组猪抑制素蛋白质稳定性,本研究利用鲎试剂、气相色谱和SDS-PAGE方法对重组猪抑制素蛋白质中的细菌内毒素、β-巯基乙醇的残留量及其蛋白质在不同温度、极端p H值和反复冻融条件下的稳定性进行检测。结果显示,经过3次等电点沉淀洗涤后,重组猪抑制素蛋白质中细菌内毒素和β-巯基乙醇的残留量大幅减少。通过在不同温度下的处理发现,重组猪抑制素蛋白质在4℃环境下较稳定,可以长期保存;但在37℃时,稳定性快速下降,随着温度上升而降解加速。通过极端p H值和反复冻融试验发现,重组猪抑制素蛋白质对极端p H值和反复冻融具有较好的耐受性。     

抑制素免疫技术提高奶牛繁殖性能的最新研究进展

在现代规模化、集约化奶牛养殖模式下,高产奶牛繁殖障碍已成为制约奶牛养殖经济效益的瓶颈。为提高奶牛繁殖效率,研究人员先后开发了同期发情、预同步、双同步等繁殖调控技术应用于生产,但奶牛配种受胎率(特别是夏季热应激状态下)仍有待提升。抑制素免疫技术通过注射抑制素抗原,使机体产生特异性抗体以中和抑制内源性抑制素,从而促进卵泡发育、调控母畜繁殖性能。经过几十年的研究完善,抑制素免疫结合同期发情技术已经在提高奶牛超数排卵、配种受胎率方面获得突破性进展,表现出优异的应用效果和前景。文章基于我国奶牛繁殖性能不断下降的现状,讨论如何应用抑制素免疫技术低成本、高效地促进卵泡发育、提高胚胎质量和配种受胎率,并评价和探讨其在奶牛繁殖中的应用前景和未来的研究方向。     

发酵床垫料翻耙结合网床养殖改善鸭舍空气质量与鸭生产性能

为解决规模化肉鸭生产中粪污影响鸭健康和污染环境的问题,研发了一种发酵床结合网床架养新技术及其配套的可移动式网床下发酵床垫料翻耙系统,并研究了该模式在控制舍内气载微生物数量和提高鸭生产性能中的优势。结果显示:1)可移动式发酵床垫料翻耙系统实现不同发酵床体共用一台翻耙机。2)与发酵床平养相比,鸭26日龄之前未翻耙垫料时,发酵床网养舍内需氧菌总数(1.531×105 CFU/m3)和大肠杆菌数量(1.298×104 CFU/m3)显著升高(P0.05);鸭27~34日龄时每4 d翻耙垫料,发酵床网养舍内需氧菌总数(2.304×105 CFU/m3)和金黄色葡萄球菌数量(1.353×105 CFU/m3)显著降低(P0.05);鸭35~39日龄时每天翻耙垫料,发酵床网养舍内需氧菌总数(1.255×105 CFU/m3)和"沙门+志贺"氏菌数量(14.13 CFU/m3)显著降低(P0.05)。3)在发酵床平养舍内,与每4 d翻耙1次垫料相比,每天翻耙1次垫料舍内需氧菌总数(2.688×105 CFU/m3)、大肠杆菌(2.038×104 CFU/m3)、金黄色葡萄球菌(8.90×104 CFU/m3)和"沙门+志贺"氏菌(47.11 CFU/m3)数量显著(P0.05)降低,而在发酵床网养舍内,每天翻耙1次垫料舍内需氧菌总数(1.255×105 CFU/m3)和"沙门+志贺"氏菌(14.13 CFU/m3)数量显著降低(P0.05)。4)与发酵床平养相比,发酵床网养增加鸭体质量(P0.05),降低死亡率和上市淘汰率(P0.05)。结果表明研发的肉鸭养殖新模式能更好地减少舍内空气中病原菌浓度,改善鸭舍内空气环境,提高鸭生产性能。该研究为发酵床结合网床架养新模式在规模企业中推广应用提供技术支持。     

家鸡催乳素放射免疫测定法的建立

本文建立了测定鸡血浆样品中催乳素(chPRL) 的放射免疫测定方法。所用试剂为标准chPRL( AFP 10328B) ,碘标chPRL( AFP 4444B) ,一抗为免抗chPRL(AFP 151040789) 抗血清,二抗驴抗免IgG 抗血清。碘标采用氯胺T 改进法,减少了氯胺T 的用量,并省略了偏重亚硫酸钠的使用,碘标chPRL 比放射性为29μCi/ug 。测定的灵敏度为0-34ng/ ml, 标准曲线的ED75 、ED50 和ED25 分别为1-30 ,3-71 和10-60ng/ ml。样品批内和批间变异低于15 % 。母鸡血浆样品倍比稀释产生的结合抑制曲线与标准曲线平行;测定不同繁殖状态母鸡血浆样品chPRL 显示出显著差异且变化规律符合繁殖活动的变化。证明本方法可用于测定家鸡血浆chPRL 浓度。     

2012年广东水禽产业发展形势与对策建议

广东具有得天独厚的养殖优势,拥有丰富的水禽品种资源.2012年,广东水禽业的主产地仍为珠三角地区,水禽产品价格总体保持稳定.在简要介绍国内外水禽产业发展基本情况的基础上,重点分析了广东水禽业生产、区域分布、产品价格、科技新成果等现状,进而指出水禽产业存在的问题,提出了相应的对策建议.     

光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素mRNA水平的影响

研究了光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素基因表达的影响,试验期对照组接受短光照(11 h光:13 h暗),处理组在接受7 d短光照后接受长光照(16 h光:8 h暗).结果表明在整个试验期,对照组产蛋率维持10%以上,处理组则在接受长光照约15 d后产蛋率快速下降并于试验第55 d停产.在处理组接受长光照17 d(试验第25 d)后,与对照组相比,其下丘脑血管活性肠肽(VIP)和垂体催乳素(PRL)的基因表达稍提高(P＞0.05),血浆PRL水平明显高于对照组(P＜0.05),而促黄体素(LH)水平和卵巢大黄卵泡(LYF)数、小黄卵泡(SYF)数则无差异,仅大白卵泡(LWF)数显著低于后者(P＜0.01);在处理组接受长光照45 d后(试验第53 d),其下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达显著提高(P＜0.01),且血浆PRL质量浓度显著高于对照组(P＜0.01),LH水平则明显低于对照组(P＜0.05),卵巢上无任何卵泡,对照组的LYF、SYF和LWF数与试验第25 d时相似.整个试验期,长光照对下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体LH β的基因表达均无明显影响.表明长光照能促进下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达,提高血浆PRL水平和抑制卵泡发育.     

南方养鸭模式及鸭舍建造要点

(一)"鸭-鱼"联合生产南方许多省份,过去多采用天然水源进行鸭养殖,近二十年,则更多地将养鱼与养鸭结合,形成了较有特色的"鸭鱼"联合生产模式,进行种鸭、肉鸭和蛋鸭的生产。该生产模式中,鸭舍建设相对简单,一般是在鱼塘、河湖或水库岸边建造一个结构较为简单的开放式或半开放式鸭舍,在鸭舍与水面之间建一运动场,并在水上围出一定区域作为水上运动场。对于种鸭和蛋鸭舍,舍内需要加上产蛋箱,并安装灯具以提供人     

推广鹅反季节繁殖技术 推进新农村建设

发展现代农业,促进农村经济可持续发展,农民创业是关键,技术、资金、市场信息是助力。首先必须因地制宜,根据各地农民的自身资源优势和经济实力,发展适合自身情况的特色产业,从而提高农业的竞争力和生产力。其次必须提升农民的自我发展能力,使之成为“有文化、懂技术、会经营“的新型农民,促进农民的自主创业,开展产业化农牧业生产,促进现代农业的持续发展。     

广东地方鹅产蛋-就巢周期调控模式的探讨

马岗鹅原产于广东省开平市,是广东省的优良地方鹅种之一,具有体型大小适中、屠宰率高、肉质鲜嫩、生长快和耐粗易养等优点,深受广大消费者的欢迎,目前在广东省各地几乎都有分布,而且全省近年的饲养量增长迅猛.