烟草PR3b转录后剪切元件NRSE1与GUS融合表达后的可变剪切

【目的】烟草(Nicotiana tabacum L.)碱性几丁质酶基因PR3b在低烟碱突变体(nic1和nic2)中存在转录后mRNA可变剪切现象,但其可变剪切的发生机制仍不清楚。将PR3b的可变剪切元件NRSE1(nicotinesynthesis related splicing element 1)与GUS融合表达,分析NRSE1元件的独立可变剪切特性,以揭示其作用机制。【方法】利用PCR扩增方法获得PR3b cDNA序列中的NRSE1元件片段,并利用基因重组技术构建了烟草PR3b可变剪切元件NRSE1与GUS的融合表达载体。将融合表达载体导入农杆菌LBA4404后,通过农杆菌介导的叶盘转化法培育了表达NRSE1与GUS融合子的低烟碱突变体nic1和nic2及野生型烟草转基因植株;通过RT-PCR检测及GUS染色鉴定出阳性植株后,利用RT-PCR分析NRSE1与GUS融合表达后在低烟碱突变体和野生型烟草中的可变剪切特性;对转基因植株的幼苗进行乙烯(ET)和茉莉酸(JA)处理,通过GUS染色方法分析ET和JA处理对转基因植株中GUS活性的影响,并通过RT-PCR方法分析ET和JA...     

低烟碱烟草谱系材料创制与其叶片成分分析

烟草(Nicotiana tabacum L.)是重要的经济作物,也是自然界生物产量最大的植物资源之一,具有极大的挖掘利用潜力。然而,烟草中的高烟碱含量在相当程度上限制了烟草的多用途开发利用。为拓展烟草的利用途径,本研究创制了低烟碱烟草分离群体,结合烟碱含量和标记基因检测,选育了烟碱含量分别为0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%和1.0%的低烟碱烟草谱系材料,并进行了烟碱含量和标记基因表达水平的比较;同时,分析了烟叶符合可饲用目的需要控制的烟碱含量水平,并对低烟碱烟草叶片进行了成分分析,测定结果表明其蛋白质含量约14.0%,氨基酸总量约1.90%,总糖含量约22.0%,粗纤维含量约8.0%,叶片中具有抗菌活性的功能成分西柏三烯二醇和绿原酸的含量均在1.50%左右。本研究结果为低烟碱烟草的多用途利用提供了重要参考。