Purification and characterization of hepatic triacylglycerol lipase isolated from rainbow trout,Oncorhynchus mykiss

Trialcylglycerol (TG) lipase was isolated and partially purified from rainbow trout liver. Triacylglycerol lipase activity was assayed by measuring¹⁴C-oleic acid release from¹⁴C-triolein.¹⁴C-oleic acid release was linear for up to two hours. Optimal activity occurred at pH 7.0 and 15°C. Most of the lipase activity was recovered in the cytosolic fraction. A 27,000-fold purification was achieved after Sepharose (Bio-gel A 0.5 M, 200–400 mesh) chromatography of a resuspended 20% ammonium sulfate fraction. The molecular weight of the trout hepatic lipase as determined by size-exclusion chromatography and by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was 40–43 kD. Lipase-mediated hydrolysis of TG resulted in the production of diacylglycerols, monoacylglycerols, and fatty acids. Kinetic analysis indicated that V_max=0.016 nmol/h/mg protein and that K_m=0.28 mM triolein. Lipolytic activity was enhanced in the presence of cAMP/ATP-Mg²⁺. These results suggest that the liver of trout possesses a neutral TG lipase that is responsible for mobilizing stored TG and is catalytically activated by phosphorylation.A part of this work was presented at the Annual Meeting of the American Society of Zoologists, December 26–30, 1990, San Antonio, TX.     

Untersuchungen zur Übertragung von Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus auf gesunde Kartoffelknollen

Zusammenfassung In den Jahren 1999 bis 2003 wurde in Freiland-, Klimakammer- und Lagerungsversuchen überprüft, ob ein Risiko für die Übertragung des Erregers der Bakteriellen Ringfäule der Kartoffel (Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus) besteht, wenn (a) gesunde Kartoffelknollen in Kontakt mit Maschinen und Geräten kommen, die mit dem Erreger kontaminiert sind (indirekter Kontakt) und (b) gesunde Kartoffelknollen direkt in Kontakt mit infizierten Knollen kommen (direkter Kontakt). Nach indirektem Kontakt konnte nur beim nachfolgenden Anbau der kontaminierten Knollen in der Klimakammer Befall in Kraut und Knollen festgestellt werden. Im Freiland konnte der Erreger, auch bei wiederholtem Nachbau der geernteten Knollen, nicht nachgewiesen werden. Nach direktem Kontakt und nachfolgendem Anbau der kontaminierten Knollen in der Klimakammer und im Freiland, wurde der Erreger in allen Fällen in den geerntete Knollen nachgewiesen. Befall im Kraut wurde nur in dem Klimakammerversuch und in einem Freilandversuch ermittelt. Wurden durch direkten Kontakt kontaminierte Knollen eingelagert, konnte der Erreger in allen untersuchten Knollen festgestellt werden. Insgesamt besteht ein hohes Risiko, dass gesunde Knollen infiziert werden, wenn oberflächliche Kontaminationen mit dem Erreger erfolgen. Die Wahrscheinlichkeit von Infektionen steigt mit zunehmender Kontaminationsstärke.     

Dieter Simons

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Dieter Simons

     

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