卵形巴贝斯虫与中华泰勒虫双重PCR检测方法的建立

为建立一种能快速对卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)和中华泰勒虫(Theileria sinensis)同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的卵形巴贝斯虫AMA1基因和中华泰勒虫MPSP基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。结果显示：双重PCR可特异扩增出卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫目的条带,片段大小分别为500 bp和986 bp。该方法具有较好的特异性,对卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的最低检出浓度为16 fg/μL。对采集的90份牛血液样本进行双重PCR检测,卵形巴贝斯虫阳性率为30%(27/90),中华泰勒虫阳性率为16.67%(15/90),混合感染率为10%(9/90)。结果表明,双重PCR方法可用于卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的快速诊断和流行病学调查。     

星点设计-效应面法优化石榴皮提取物微球制备工艺研究

采用超声波法提取石榴皮多酚,乳化交联法制备石榴皮提取物微球,应用星点设计-效应面法优化壳聚糖沉积时间、乳化剂用量和海藻酸钠用量对微球载药量的影响。结果表明,石榴皮最佳提取条件下干浸膏得率为50.5%,其中干浸膏中多酚质量分数为47.8%;采用二项式方程拟合微球实验结果,相关性较好(r=0.994),海藻酸钠用量0.98%、壳聚糖沉积时间2.56 h、乳化剂用量17.83%、固化时间5 h,戊二醛1 m L为优化的最佳制备工艺条件,此条件下微球载药量为12.19%,与预测值偏差较小。最优条件下微球对DPPH自由基清除率为96.92%,四联球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌直径分别为2.70、2.78和2.72 cm。37℃,75%湿度下放置一星期后的石榴皮提取物和及其微球DPPH自由基清除率分别为:78.53%,91.26%。     

星点设计-效应面法优化石榴皮抗氧化物的提取工艺研究

为优化石榴皮抗氧化物质的提取条件。考察了温度、时间和乙醇浓度对石榴皮抗氧化物质提取的影响,采用星点设计-效应面法对石榴皮抗氧化物提取条件进行优化,并对结果进行了验证。结果,石榴皮抗氧化物的最佳提取温度为29℃,时间为26min,乙醇浓度为54%。结论,所用工艺简单易行,星点设计-效应面优化法预测结果良好。     

吉林省部分地区蜱和羊携带羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体分子流行病学调查

为调查吉林省部分地区蜱虫和羊体内羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的流行情况，本试验采用PCR方法对采自吉林省5个地区的340份羊血液样本和841份蜱虫样本进行检测，并对部分阳性样本测序，建立系统发育树。结果显示，蜱虫中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别为4.64%(39/841)和7.13%(60/841);羊血液样本中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别17.06%(58/340)和10.00%(34/340),混合感染率为3.24%(11/340)。蜱虫和羊血液样本中感染的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫单独感染，未检测到尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫。系统发育树分析显示，蜱虫和羊血液样本中检测到的泰勒虫与吕氏泰勒虫处于同一分支，与吕氏泰勒虫河南株亲缘关系较近，与尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫亲缘关系较远；蜱虫和羊血液样本中检测到的嗜吞噬细胞无浆体与韩国株、俄罗斯株处于同一分支，亲缘关系较近。结果表明，吉林省羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体感染普遍存在。本调查结果为吉林省羊泰勒虫病和嗜吞噬细胞无浆体病的综合防治提供了理论依据。