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采用正交试验,研究培养基类型、激素配比及浓度、蔗糖浓度对桫椤原叶体增殖及幼孢子体形成的影响。结果表明:不同NAA和蔗糖浓度对原叶体增殖的影响差异极显著,不同BA浓度对幼孢子体的形成影响极显著;桫椤原叶体增殖的适宜配方为MS+0.5 mg/L NAA+0.01 mg/L BA+0.1 mg/L TDZ+20 g/L蔗糖,增殖率为20.31%;合适分化培养基为N6+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L TDZ+20 g/L蔗糖,分化率为13.60%。试验结果对桫椤孢子再生体系的建立提供技术支撑。 相似文献
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以四倍体果桑品种嘉陵30号(Morus atropupurea Roxb.)的春芽和冬芽为外植体,建立了嘉陵30号的高频再生体系。结果表明,冬芽比春芽更适合作外植体,低温处理后再用赤霉素处理对解除冬芽休眠效果最好;0.1%HgCl_2消毒15min且在培养基中添加300mg/L噻孢霉素钠盐(Cef,Cefotaxime Sodium Salt)能有效控制污染;培养基MS+3.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA适用于果桑的初代和继代培养。嘉陵30号通过直接器官发生途径再生,使用不定芽诱导丛生芽此种增殖方式效果更佳,增值系数高达7.04,且苗粗壮,生长旺盛,最适诱导培养基为1/2MS+0.6mg/L IAA,生根率可达87.5%,根系粗壮。 相似文献
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【目的】克隆桑树的谷氨酸脱氢酶基因GDH,了解其结构、组织特异性表达以及调控特点,并获得桑树谷氨酸脱氢酶蛋白,为进一步研究谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)在桑树氮代谢过程中的功能奠定基础,也为多年生木本植物的GDH研究提供参考。【方法】根据川桑基因组数据库搜索GDH同源序列设计引物,以杂交桑品种桂桑优62号(M. atropurpurea Roxb.)cDNA为模板,通过RT-PCR克隆获得MaGDHs。利用NCBI上BLAST和CDD进行氨基酸序列比对和保守结构域分析;利用Expasy在线软件对MaGDH氨基酸组成、分子量、等电点进行分析;采用MEGA 5.0软件构建系统进化树;通过qRT-PCR检测试管苗在不同浓度的蔗糖、铵盐、激素(6-BA)状态下MaGDHs的表达量,用StepOne Software V2.1软件根据2-△△Ct法进行基因相对表达量分析。以pET-28a(+)、pET-32a(+)、pCold-TF为载体构建MaGDH的融合蛋白重组质粒并转入到大肠杆菌中进行表达。【结果】成功获得2个MaGDHs,序列全长均为1 236 bp,编码411个氨基酸,含一个开放阅读框,分别命名为MaGDH1和MaGDH2。MaGDH1蛋白质的分子量为44.1 kD,理论等电点为5.84,MaGDH2蛋白质的分子量为44.2 kD,理论等电点为6.68。MaGDHs氨基酸序列含有9个外显子,8个内含子,具有线粒体转移肽、Glu/a-KG结合域和NAD(P)结合域,与川桑同源性均为99%,与双子叶植物同源性为90%左右,与单子叶植物的同源性为85%左右。重组蛋白MaGDHs以包涵体的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经过纯化和复性后获得了具有活性的酶蛋白,酶活性以pET-28a(+)-MaGDH1重组蛋白最高,为10.07 nmol·min-1·mL-1。MaGDHs的表达具有组织特异性,在桑花中表达量最高,其次是嫩叶,在果实中几乎不表达。MaGDHs的表达受到蔗糖、NH4+和6-BA的调控。随着蔗糖浓度的增加,MaGDHs表达量增加;过量的NH4+促进MaGDH1的表达,而没有NH4+的情况下,MaGDHs也有表达;细胞分裂素对MaGDHs的表达是先抑制后促进,MaGDH1在24 h后表达增强,MaGDH2在48 h后表达增强。【结论】从桂桑优62号中获得了两个MaGDHs,分别编码β和α亚基。不同载体的重组蛋白酶活性存在差异。MaGDHs的表达具有组织特异性,在桑树生长旺盛的组织中表达量较高。过量NH4+促进MaGDH1表达;MaGDH1响应激素促进表达比MaGDH2早。 相似文献
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