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为明确药西瓜UDP-糖基转移酶催化葫芦素形成葫芦素配糖体的表达规律,以药西瓜品种"WM9"叶片为供试材料,采用RT-PCR技术克隆药西瓜UDP-糖基转移酶基因,并对编码蛋白进行分析。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR),以ACTIN为内参基因,分析获得的2个药西瓜UDP-糖基转移酶基因在不同组织器官中的表达规律。结果表明:克隆得到2个UDP-糖基转移酶基因,分别为1 546 bp和1 559 bp的cDNA全长序列,命名为UDP-E1和UDP-E2。对扩增获得的序列进行生物学信息分析,确定UDP-E1基因的完整开放阅读框(ORF)为1 314 bp,可编码氨基酸437个,理论分子量为49.02 ku,等电点为5.99,属稳定蛋白,Genbank登录号MK576125。UDP-E2基因的ORF为846 bp,可编码氨基酸281个,理论分子量为32.78 ku,等电点为5.23,属不稳定蛋白,Genbank登录号MK576126。这2个基因属于糖基转移酶超家族。UDP-E1和UDP-E2均与香瓜、黄瓜的UDP-糖基转移酶基因序列相似性最高。在各组织器官中,UDP-糖基转移酶均有表达,且在茎中表达水平最低,叶中表达水平最高。 相似文献
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以药西瓜为试材,采用连接转化、双酶切等方法,在前期克隆得到的2个药西瓜UDP-糖基转移酶基因UDP-E1、UDP-E2的基础上,将目的基因UDP-E1、UDP-E2与pET28a连接,构建重组质粒pET28a-UDP-E1和pET28a-UDP-E2,将重组质粒转化至E.coli BL21中,经过不同浓度的IPTG诱导,期望出现目的蛋白条带,且上清中的目的蛋白条带较沉淀与对照组明显。结果表明:成功构建原核表达重组质粒,IPTG浓度为1.0 mmol·L~(-1)时,UDP-E1的融合蛋白分子量约为49 kDa,IPTG浓度为0.8 mmol·L~(-1)时,UDP-E2的融合蛋白分子量约为32 kDa,目的蛋白在大肠杆菌BL21中得到了高效表达。 相似文献
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