居群遗传学与遗传多样性研究在珍稀濒危植物保护中的应用

本文介绍了有效居群大小、近交繁殖、遗传漂变和基因流等重要概念，而后详述居群遗传学原理在珍稀濒危植物保护中的应用及前景。也对珍稀濒危植物保护中遗传多样性因子所起的重要作用及研究进展作了评述。从遗传多样性水平上看，本文分析的主要关键是讨论什么时候以及什么情况下，居群遗传学在珍稀濒危植物保护应用中起至关重要的作用，并强调居群统计学过程和外在因素的影响在珍稀濒危植物保护中也占同等重要的位置。     

濒危植物缙云黄芩种群生态位研究

根据样地调查所得到的数据，采用Levins生态位宽度和Hudbert生态位宽度及Pianka生态位重叠等计算公式，测定了缙云黄芩(Scutellaria tsinyunensis C．Y．Wuets．Chow)八个种群中草本层的生态位宽度和生态位重叠。结果显示，八个种群中有七个种群的生态位宽度在群落中是最大的，说明缙云黄芩的生态适应幅度较大，对环境资源的利用能力较强；研究还发现，尽管缙云黄芩具有较大的生态位宽度，但具有相同或相似环境要求的物种问的生态位重叠较大，表明他们间对资源利用的相似程度较高，缙云黄芩与其他主要伴生物种间对生境内有限资源存在较激烈的竞争，这可能是导致其分布区狭窄、逐渐濒危的因素之一。     

黑守瓜中一种新negevirus的鉴定和分析

negevirus(nege-like virus)是病毒学领域新增的一个分类单元,主要包括在节肢动物中鉴定的一类昆虫特异性病毒。本研究利用宏转录组技术从黑守瓜（Aulacophora lewisii）中鉴定到一种新的negevirus,命名为Nbu Aulacophora lewisii nege-like virus 1(NbuALNV-1)。NbuALNV-1为正义单链RNA病毒,全基因组包含9 832个核苷酸（nucleotide, nt）（不包括多聚腺苷酸尾）,5′、3′非翻译区长度分别为292、77 nt。NbuALNV-1基因组包含6个开放阅读框,预测具有5个典型的negeviruses保守结构域,包括病毒甲基转移酶结构域、RNA病毒解旋酶结构域、RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase, RdRp）结构域、DISB-ORF2＿chro结构域和SP24结构域。本研究利用NbuALNV-1和已报道的negeviruses的RdRp氨基酸序列基于最大似然法构建的系统发育分析表明,NbuALNV-1与Hubei Wuhan insect...     

与RBSDV外壳蛋白P10互作植物因子的筛选与验证

目前,我们对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)编码的外壳蛋白P10在该病毒侵染过程中的作用了解甚少。本研究利用酵母双杂交技术,以P10为诱饵钓取拟南芥cDNA文库,得到与P10互作的真核翻译起始因子eIF5A-2。通过分别构建猎物和诱饵载体共转化酵母,结果表明P10与AteIF5A-2在酵母中互作。利用农杆菌转染烟草表皮细胞瞬时表达体系发现,P10和AteIF5A-2形成融合荧光蛋白后,荧光主要形成囊泡状的结构。通过荧光共定位实验分析发现,P10与AteIF5A-2能够共定位。本研究结果进一步揭示了水稻黑条矮缩病毒的致病机制。     

小麦黄花叶病抗性鉴定及抗性亲本简单重复序列

小麦梭条斑花叶病毒（wheat spindle streak mosaic virus,WSSMV）又名小麦黄花叶病毒（wheat yellow mosaic virus,WYMV）是造成小麦Triticum aestivum减产的重要病害。不同的小麦品种对WYMV病害的抗性表现相当复杂。推广抗性品种是防止WYMV大面积田间发病的有效措施。以从国内外收集到的527个小麦品种/系为材料,对其WYMV抗性进行了病圃鉴定,筛选抗性稳定的品种/系,并以其中推广面积较大的WYMV抗性和敏感品种为亲本筛选在抗性和敏感亲本间具有多态性的简单重复序列（SSR）标记。结果表明:527个候选材料中只有10个品种/系的抗性相对比较稳定。以其中3个推广面积较大的WYMV抗性品种丰抗1号T. aestivum Fengkang 1,石家庄72 T. aestivum Shijiazhuang 72,郑麦9023 T. aestivum Zhengmai 9023以及2个推广面积较大的WYMV敏感型品种扬麦158 T. aestivum Yangmai 158和烟农22 T. aestivum Yangnong 22为亲本,筛选在抗性和敏感亲本间具有多态性的SSR标记。结果表明:丰抗1号/扬麦158和石家庄72/扬麦158间的简单重复序列多态性最大,分别为64.0%和63.3%。因此,以WYMV抗性品种丰抗1号和石家庄72,以及WYMV敏感品种扬麦158为亲本材料构建作图群体更有利于利用分子标记对控制WYMV抗性数量性状位点（QTLs）进行精细定位和目标基因的图位克隆。图2表3参17     

水稻黑条矮缩病毒和水稻条纹叶枯病毒侵染下水稻qRT\|PCR内参基因的筛选

 病毒侵染通常会干扰寄主细胞的生理代谢过程,分析病毒侵染后寄主基因的表达差异,将为病毒与寄主之间的互作研究提供重要的分子基础。实时荧光定量PCR(qRT\|PCR)是目前基因表达分析中应用最广泛的方法之一,选择合适的内参基因对实验进行校正和标准化至关重要。但是,一些常用作内参的看家基因会受到病毒侵染的影响。本研究中,以感染水稻黑条矮缩病毒(Rice black\|streaked dwarf virus,RBSDV)和水稻条纹叶枯病毒(Rice stripe virus,RSV)的水稻总RNA为材料,利用qRT\|PCR技术和3个统计学软件探讨了10个常用内参基因在病毒侵染下的稳定性。结果显示,感染RBSDV和RSV水稻中表达最稳定的都是UBC和β\|TUB。因此,可选用UBC和β\|TUB组合作为分析RBSDV和RSV侵染过程的水稻内参基因。     

单头灰飞虱体内两种水稻病毒的双重一步法RT PCR检测

灰飞虱传播的水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)和水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV)是危害我国水稻生产最主要的2种病毒,建立灰飞虱体内RSV和RBSDV快速、可靠的检测方法是水稻生产中的重要问题。本研究根据RSV RNA3和RBSDV S10序列分别设计了2个病毒的特异性引物,通过退火温度和PCR循环数等条件的优化,建立了灰飞虱体内RSV和RBSDV快速鉴定的双重一步法RT PCR体系。对一步法和两步法RT PCR检测结果进行比较,表明2种方法均能准确有效鉴定灰飞虱体内的2种病毒,且两步法的检测效果略好于一步法。而灵敏度实验表明一步法RT PCR可以从0005 ng·μL-1的灰飞虱RNA初始模板中准确检测到病毒,完全满足单头灰飞虱体内病毒检测的需要。应用本研究建立的双重一步法RT PCR体系对200头获毒灰飞虱样品中的RSV和RBSDV进行了检测,结果进一步证实了此方法的稳定性和可靠性。     

小麦黄花叶病毒P3蛋白致病功能域的鉴定和分析

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。     

浙江省十字花科蔬菜有害生物发生与治理现状调查研究

以菜农为调查对象，采取问卷调查的方式，调查了浙江省12个十字花科蔬菜主要产区从业人员的组成结构、生产技能以及有害生物治理等现状，分析讨论了当前生产中存在的突出问题，并提出了相应的治理对策。     

模式植物二穗短柄草在禾本科作物与病原互作研究中的应用

二穗短柄草(Brachypodium distachyon)因其基因组小、株型小、自花授粉、一年生、生命周期短、有二倍体和一系列多倍体、易培植、易转化等诸多优点,正逐渐成为一种理想的禾本科作物模型。最近的研究表明,二穗短柄草对许多主要的禾谷类作物病原菌敏感。因此,研究二穗短柄草-病原菌的相互作用可以提高人们对禾本科作物抗病能力的认识。本文综述了二穗短柄草与真菌、病毒和其他禾谷类作物病原菌互作的研究成果,以及利用二穗短柄草进行禾本科作物抗病机制研究的现状。展望了二穗短柄草作为作物-病原体相互作用的研究模型的发展前景。