紫花苜蓿MsSQE1的克隆及对皂甙合成的功能分析

【目的】鲨烯环氧酶（squalene epoxidases,SQE）是苜蓿皂甙合成途径中的一种限速酶,与苜蓿皂甙的合成密切相关。通过对苜蓿鲨烯环氧酶（MsSQE1）基因的克隆及在苜蓿中过表达,探究鲨烯环氧酶对皂甙合成的作用机制。【方法】以模式植物蒺藜苜蓿鲨烯环氧酶基因序列设计引物,同源克隆苜蓿MsSQE1。对MsSQE1进行生物信息学分析;通过基因枪轰击技术,使MsSQE1在洋葱表皮瞬时表达,进行亚细胞定位。利用qRT-PCR方法分析该基因在根、茎、叶中的表达水平,以及在紫外辐射、ABA和GA₃条件下的表达模式。在茉莉酸甲酯（MeJA）的诱导下,分析MsSQE1的转录水平,及对苜蓿皂甙含量的影响。利用根癌农杆菌转化体系,获得过表达MsSQE1的阳性转基因植株,并测定转基因植株的皂甙含量。【结果】克隆了MsSQE1的cDNA序列,开放阅读框1 578 bp,编码525个氨基酸,等电点为8.59。同源性比对分析,其氨基酸序列与蒺藜苜蓿中SQE1氨基酸序列同源性为98.6%,与拟南芥的同源性为80%。亚细胞定位显示,MsSQE1可能定位于细胞膜。组织特异性表达分析显示,MsSQE1在叶中的表达量最高,茎中次之,根中的表达量最低。在紫外辐射、ABA和GA₃的诱导表达显示,紫外辐射诱导24 h,叶中表达量最高; GA₃（50 μmol·L ^-1）和 ABA（100 μmol·L ^-1）处理,均为8 h叶中表达量最高;MeJA处理能诱导MsSQE1表达量上调的同时苜蓿总皂甙含量也随着MsSQE1表达的上调而增加。分析过表达MsSQE1转基因苜蓿和转空载体苜蓿株系发现,MsSQE1的表达水平和总皂甙含量均升高,其中MsSQE1的表达水平是对照的3.11—9.45倍,总皂甙含量比对照提高14.26%—28.05%,暗示MsSQE1是苜蓿皂甙合成途径中的一种关键调节酶。【结论】从豆科牧草紫花苜蓿中克隆了MsSQE1并进行功能分析。在苜蓿中过表达MsSQE1能增加苜蓿总皂甙含量,暗示MsSQE1的表达影响苜蓿皂甙的生物合成,可能对皂甙的合成有重要的调节作用。     

紫杉木材解剖构造及其材性分析

运用对比分析的方法对紫杉（ＴａｘｕｓｃｕｓｐｉｄａｔａＳｉｅｂ．）木材的解剖特征、管胞的大小、长宽比等进行了较详细地测定与分析;对紫杉木材的气干密度、干缩系数、化学成分进行了测定。结果表明：紫杉木材射线管胞内壁锯齿状加厚明显,交叉场纹孔多为窗格状,偶见松型,管胞的长宽比平均值约为５０,气干密度平均值约为５９８ｋｇ／ｍ３,差异干缩约为１８;１％ＮａｏＨ抽出物较落叶松高,其它化学指标比落叶松低。     

3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因的克隆与分析

【目的】克隆3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因,分析其在不同条件下的表达特性;构建植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐盐性进行初步鉴定。【方法】根据已获得的cDNA序列设计引物,扩增MsERF5、MsERF8和MsERF11的DNA序列,并分析基因结构;利用半定量RT-PCR技术分析其组织表达特异性和胁迫条件下的表达特性;通过农杆菌介导的方法转化烟草,鉴定盐胁迫条件下转基因烟草的表型和生理生化特性,初步验证其功能。【结果】MsERF5、MsERF8和MsERF11都不包含内含子。MsERF5在根、叶和花蕾中的表达量高于茎和花;MsERF8在根和叶中的表达量高于茎、花蕾和花;MsERF11在叶中的表达量最高;3个基因都能被多种非生物胁迫（盐、干旱、铝）和激素（脱落酸、赤霉素、乙烯利、水杨酸和茉莉酸甲酯）诱导,但表达模式不同。在盐浓度为200 mmol•L-1的筛选培养基上只有导入目的基因的愈伤组织能产生不定芽,250 mmol•L-1 NaCl处理再生植株10 d,转基因植株和野生型植株叶片的电导率和可溶性糖含量均呈现上升趋势,但野生型植株叶片的电导率显著高于转基因植株,可溶性糖含量则显著低于转基因植株（P＜0.05）;转基因植株和野生型植株叶片的叶绿素含量均呈现下降趋势,野生型植株叶片叶绿素含量显著低于转基因植株（P＜0.05）;盐胁迫条件下,转化不同基因的再生植株的电导率、叶绿素和可溶性糖含量没有显著差异（P＞0.05）。【结论】3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因都不包含内含子,其表达具有组织特异性,都能被多种非生物胁迫和激素诱导,能够使烟草愈伤组织在含盐培养基上形成不定芽并最终产生转基因植株,且转基因植株的耐盐性高于野生型植株。     

猪瘟、败血型链球菌和猪附红细胞体混合感染的综合防治措施

2005年1～5月份，在我市一些猪场发生了猪瘟、败血型链球菌与附红细胞体混合感染的疾病。现将诊治过程报告如下：     

生产中急需开发的农机化新机具

生产中急需开发的农机化新机具农业部农机化技术开发推广总站张铁军结合《农机化发展“九五”计划及２０１０年规划》中提出的１４项研制开发内容，以及各地在生产实践和推广活动中提出的问题，全国各地农村对以下农机化新机具的需求较为迫切。１．种子繁育机具播种环节需...     

解决农村环保问题建设生态和谐新农村

农村生态环境建设是新农村建设的重要内容之一,进一步改善农村生态环境.实现人与自然的和谐,是建设社会主义新农村和全面建设小康社会的基础.     

药物诱导母猪白天产仔

目前，大部分母猪都是夜间产仔，由于护理和接产工作不及时，很容易造成仔猪被压死、窒息等非正常死亡，严重影响了养猪的经济效益。     

提高板坯预压效果的研究

为提高板坯预压效果，对ＵＦ树脂的制法和调胶进行了改进，试验结果表明，在ＵＦ树脂制造时加入氨基磺酸，调胶时加入保水剂，可使树脂水溶性增加，贮存期延长，胶液活性期长，并可防止干燥胶合现象。胶粘剂的预压效果好，所压制的胶合板质量符合ＧＢ９８４６．１－９８４６．１２－８８Ⅱ类胶合板标准，ＵＦ树脂成本不增加。     

节水从农业抓起(下)

(二)区域布局及发展重点 1.区域布局 为因地制宜地制定不同地区节水农业的发展方向和建设重点,考虑各行政区的自然地理状况、社会经济发展条件、农业区域特征等综合因素,国家有关部门将全国分为5大节水农业区,并划分了二级区。(见表1)     

农用车故障的诊断方法

引起农用车产生故障的原因,往往错综复杂。一个机构或部件出问题,同时引起几种故障;一种故障,可能是几个原因引起的。要排除故障,首先要了解各类故障的特点和现象,然后通过综合分析,找出产生故障的原因,最终才能判断故障的确切部位。农用车故障的分析与判断,通常有以下几种方法。