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中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究 总被引:1,自引:1,他引:0
构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。 相似文献
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构建亚非马蜂和额斑黄胡蜂前溶血肽原基因的重组供体质粒pBacHT-PhPPM和pBacHT-VmPPM,转化到穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,得重组穿梭载体Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn-5B1-4,最后观察细胞表达时相动态.经ELISA法证实,胞内表达产物具有良好的抗原性,证明二种重组病毒Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM已在昆虫细胞中得到了表达. 相似文献
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选用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)基因组中序列特异性很高的p16基因为目标基因,通过设计引物、PCR扩增、目的片段与载体连接转化获得含p16基因的重组质粒进行测序,进而以经测序鉴定的p16基因的PCR纯化产物作为实时荧光定量PCR标准品模板,稀释后建立SYBR Green I荧光定量标准曲线,统计分析显示标准品浓度的对数值与Ct值之间存在良好的线性关系(R2=0.9981)。该方法的检测灵敏度为102,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间变异系数均小于3%。同时分别对含有其他茶树害虫病毒和不同浓度的茶尺蠖病毒产品的样品进行检测,能明确样品中是否含有EoNPV及含量。根据已建立的方法对感染病毒后不同时间段的茶尺蠖幼虫进行检测,每克幼虫样本内p16基因拷贝数的增殖倍数对数值与感染时间呈正相关(R2=0.9935),可以获得茶尺蠖幼虫感染病毒后不同时间的增殖动态。上述结果表明,该方法能定性定量鉴定茶尺蠖核型多角体病毒,可用于茶尺蠖核型多角体病毒类生物农药的检测和感染过程检测。 相似文献
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从意蜂毒腺抽提总RNA,用RT-PCR获得蜂毒透明质酸酶(AmHya)基因,其核苷酸序列全长为1 149 bp.将AmHya氨基酸序列与中蜂蜂毒透明质酸酶(AcHya)和其它5种透明质酸酶(Hya)氨基酸序列比较,结果显示,AmHya与 AcHya的同源性最高(91%),同时对7种Hya作了分子结构与分子进化分析. 相似文献
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用8种脱脂大豆粉和纤维素粉含量不同的半合成饲料饲养4龄蚕,结果表明取食蚕蛋白含量为7.79^和11.69%饲料的幼虫分别仅存活5.7天和6.8天,取食蛋白质含量大于15.59%的有正常蜕皮,随着饲料蛋白 含量从15.59%增至38.97%。4龄历期从8.7天缩短至6.7天,平均干物食下量和消化量分别从每蚕485mg和149mg降至224mg和127mg,近似消化率则从32.04%增至52.05%。 相似文献
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本文报道1-3龄一回平板给饵法的饲育密度和空间对幼蚕生长发育的影响。结果表明,随着密度从每340cm^2饲育10头增至210头,蚕体的生长发育速率减慢,平均体得和眠蚕体重均显著下降。平板状饲料上方的空间高度在1.0-6.0cm范围内,3龄眠蚕体重在2.0cm处理为最重,但对蚕体生长发育速率和平均体重影响则不显著。1-3龄一回育的饲育密度建议以每头蚕体占面积2.1-2.7cm^2为宜。 相似文献
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含豆腐渣粉末的小蚕人工饲料 总被引:1,自引:0,他引:1
本试验以降低1~3龄小蚕人工饲料的成本为目的,使用豆腐渣粉末代替人工饲料中的部分原料。经1~3龄一回给饵法无菌饲育,结果说明小蚕对干物中含15%豆腐渣粉末的低成本人工饲料,比对普通人工饲料的取食量大,生长速度快,3龄眠蚕体重重。且豆腐渣粉末可明显改善不含琼脂和纤维素的饲料的物理性状,值得进一步探讨利用。 相似文献
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用8种脱脂大豆粉和纤维素粉含量不同的半合成饲料饲养4龄蚕.结果表明取食蛋白质含量为7.79%和11.69%饲料的幼虫分别仅存活5.7天和6.8天,取食蛋白质含量大于15.59%的幼虫能正常蜕皮,随着饲料蛋白质含量从15.59%增至38.97%,4龄历期从8.7天缩短至6.7天,平均干物食下量和消化量分别从每蚕485mg和149mg降至224mg和127mg,近似消化率则从32.04%增至52.05%. 相似文献