扫描及负染电镜在兔脑炎原虫病诊断中的应用

12只临床表现头颈歪斜、昏睡、震颤、局部或全身轻瘫的可疑为兔脑炎原虫病的獭兔 ,对其肾脏皮髓交界和尿沉渣分别进行了扫描电镜和负染电镜观察 ,看到了大小为 1～ 1 .5× 1 .4～ 2 .5μm,形态呈卵圆形和杆状的兔脑炎原虫。阳性检出率为 1 0 0 %。说明扫描及负染电镜术是诊断兔脑炎原虫病的一种较为可靠的技术。     

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测

利用杆状病毒表达系统对H5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm—T—H5HA质粒用BamHⅠ及NotⅠ酶切，获得HA基因片段，同时杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ也用BamHⅠ及NotⅠ酶切，然后用T4DNA连接酶连接，构建了重组质粒pFastBac—H5HA。再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组质粒Bacmid—H5HA。将Bacmid—H5HA转染sf9细胞，获得重组杆状病毒，经SDS—PAGE和Western blotting检测表明，HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。     

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.     

日本脑炎病毒囊膜蛋白的基因原核表达及抗原性分析

参照GenBank中的日本脑炎病毒序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因得到cDNA,克隆至pMD-18T载体,经测序证实后亚克隆至原核表达载体pET-28a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明,成功构建了重组质粒pET-28a/JEV E,目的蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot检测表明,表达产物与兔抗JEV多克隆抗体呈阳性反应,在ELISA试验中,用表达出的E蛋白包被,能够很明显地区分出猪日本脑炎阴性、阳性血清。     

猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察

利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。     

重组鸡痘病毒vFV282疫苗株在鸽体内的分布及毒性试验

采用翅内侧皮肤无血管处刺种途径给30日龄幼鸽接种重组鸡痘病毒vFV282疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸽体内的分布及其动态并对其毒性进行了研究。结果显示,接种后6 h即在脾脏检测到病毒DNA;接种后1 d,脾、肺PCR检测阳性;3 d,在心、肝、脾、肺、肾、皮肤均检测到病毒DNA;7 d,心、肝、脾、肺、肾、脑PCR检测均呈阳性;10 d,除脑外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,15 d后所有内脏器官PCR检测结果均为阴性。而对照组在整个试验期间PCR检测结果均为阴性。毒性试验表明,重组鸡痘病毒vFV282疫苗株使用安全。     

利用BrdU在CEF(TK~ )细胞中筛选TK~-重组鸡痘病毒

将新城疫病毒 (NDV)四平株 HN基因 ,插入不含报告基因、以 TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2中的复合启动子下游 ,获得重组表达质粒 p UTA- 2 HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,培养、收获病毒后 ,用含 40 m g/ L 5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶 (Brd U )的培养液 ,在 CEF(TK )细胞中筛选培养 2代 ,然后用不含 Brd U的培养液进行病毒蚀斑纯化 ,成功筛选出表达 NDV HN蛋白的 TK-重组鸡痘病毒     

用单抗研究T细胞与牛流行性白血病发生的关系

本试验对10头患流行性白血病病牛的不同器官的肿瘤组织，用8种单克隆抗体（McAb),TH14B、BAQ44A、PIg45A、BIg715A、PIg501E、cAct105、MM1A、AHCC125染色进行了观察。结果：病牛经临床病理学和免疫琼扩试验而诊断为EBL，通过免疫组织化学检测，在10个病例中发现有9个病例的肿瘤组织对B细胞属性的McAb有很强的染色反应，证明其来源于B细胞。仅有1个病例对B细胞属性的McAb着色很淡，而对T细胞属性的McAb着色很深，呈强阳性反应，说明其来源可能与T细胞有关。     

马立克氏病双价苗的研究Ⅲ.双价苗与单价苗免疫效应的比较病理学研究

选用SPF种蛋孵化的京白鸡60只,随机分为三组,即马立克氏病单价苗组(2000PFU HVT)、双价苗组(2000 PFU HVT 1200 PFU SB—1)以及攻毒对照组.应用组织学和透射电镜等手段对两种疫苗的免疫保护效应进行了比较病理学研究.结果证明,双价苗免疫鸡,MD发病数显著减少,发病时间推迟,病变程度明显减轻,法氏囊有大量具有分泌活性的浆细胞;单价苗免疫鸡发病数较对照组略有减少,但对延缓或减轻MD肿瘤的发生无明显作用,在法氏囊网状细胞胞浆中、核碎片附近和细胞间隙中存在大量无囊膜的马立克氏病病毒粒子,残存的细胞发生变性、坏死.由此认为,双价苗对实验性鸡马立克氏病的免疫效果明显优于HVT单价苗.