副溶血性弧菌vtrB基因敲除菌株的构建及其在抵抗胆汁中的作用

构建副溶血性弧菌转录调节因子VtrB （V.parahaemolyticus T3SS2 regulator B）敲除菌株和回补菌株,探讨VtrB在副溶血性弧菌抵抗胆汁中的作用。根据GenBank数据库中副溶血性弧菌vtrB基因上下游序列设计引物,通过融合PCR将vtrB基因上下游同源臂融合并克隆入自杀质粒pDS132中,将重组自杀质粒转入大肠杆菌S17-1 λpir中,再接合转移至副溶血性弧菌中进行同源重组,通过10%蔗糖筛选获得vtrB基因突变株ΔvtrB。将pBAD33-vtrB重组质粒电转入ΔvtrB突变株中获得回补菌株C-ΔvtrB。研究副溶血性弧菌野生型、突变株和回补株在2%脱氧胆酸盐（DOC）处理后的存活率。基于同源重组原理,经vtrB基因的PCR扩增和转录水平检测结果表明,成功获得副溶血性弧菌vtrB基因缺失突变株ΔvtrB和回补株C-ΔvtrB。与野生型和回补菌株C-ΔvtrB相比,ΔvtrB突变株在2% DOC处理20、40和60 min后的存活率分别为17%、4%和1%,vtrB基因的失活使得副溶血性弧菌对胆汁抵抗能力极显著降低（P<0.001）,表现出存活能力的缺陷。由此表明,转录调节因子VtrB有助于副溶血性弧菌对胆汁的抵抗。     

农杆菌介导的基因敲除技术在丝状真菌基因功能研究中的应用

 近年来不少丝状真菌全基因组测序已经完成或正在进行,基因功能研究已成为真菌研究的一个热点。利用反向遗传学的方法敲除基因是研究丝状真菌功能基因的常用方法之一,基因敲除是通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组,可以敲除整个基因,或者将一个基因替换成该基因的等位基因,或者用一个调控启动子替换一个基因正常的启动子,从而精细地定点修饰和改造基因DNA片段的技术。本文简述了利用农杆菌介导的遗传转化方法（ATMT）进行基因敲除的技术在丝状真菌基因组功能研究中的应用。     

近交系基因敲除小鼠微卫星不稳定性分析

前期研究中选取了198个与基因突变和疾病相关的小鼠微卫星不稳定性位点,经对转基因和基因突变小鼠研究,发现有41个位点具有不稳定性.为了进一步确认这些位点与基因改变的相关性,本试验应用这41个微卫星位点对29种C57BL/6J基因敲除小鼠进行了检测,并将野生型C57BL/6J和129品系小鼠(ES供体)作为对照.通过PCR扩增,STR扫描和直接测序的方法检测微卫星的不稳定性.在41个微卫星位点中有10个位点在11种基因敲除小鼠中呈现不稳定性(24.4％,10/41).核心序列为三核苷酸的D3Mit22在9号基因敲除小鼠中显示不稳定性,其余40个位点的核心序列均为二核苷酸,有9个位点呈现不稳定性(22.5％,9/40);另一方面,29种基因敲除小鼠有11种出现了不稳定性(37.9％,11/29);(TG)n为核心序列的二核苷酸表现不稳定性的比率最大(50％,2/4),依次为(GT)n(27.27％,3/11)和(AG)n(25％,1/4),重复序列(CA)n、(CT)n分别为23.08％(3/13)和20％(1/5).克隆测序的结果显示,6种基因敲除小鼠呈现核心序列片段的插入,1种基因敲除小鼠则为缺失.有2个位点(D13Mit3和D14Mit102)在2种基因敲除小鼠中出现不稳定性,9号基因敲除小鼠在2个位点(D3Mit22和D13Mit3)呈现不稳定性.结果显示基因敲除小鼠出现了微卫星不稳定性.     

苏云金芽胞杆菌CT-43内生质粒pBMB0558上virD4基因的功能

苏云金芽胞杆菌CT-43高产苏云金素,其内生质粒pBMB0558上virD4基因编码的VirD4蛋白与Ⅳ型分泌系统中结合底物的偶合蛋白(T4CPs)高度同源.本研究利用插入缺失突变方法,构建同源双交换载体,敲除CT-43中的virD4基因,得到1株突变株BMB1122.HPLC检测结果显示,突变株BMB1122发酵上清...     

Vegetative compatibility and pathogenicity of <Emphasis Type="Italic">Verticillium dahliae</Emphasis> isolates from chrysanthemum in Turkey

A collection of 30 strains of Verticillium dahliae, recovered during 2004–2006 from 12 cultivars of chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium) in five districts of İzmir province in Turkey, was assigned to vegetative compatibility groups (VCGs) based on pairings of complementary nitrate-nonutilizing (nit) mutants induced on a chlorate-containing medium. Of these strains, nine were assigned to VCG1, seven to VCG2A, 11 toVCG2B and one to VCG4B. The remaining two strains could not be tested for vegetative compatibility because of their inability to yield nit mutants. Pathogenicity tests conducted by the root-dip method, demonstrated that wilt of chrysanthemum in Turkey is caused by V. dahliae, and most strains in VCG1 were significantly more aggressive to chrysanthemum than those in VCGs 2 and 4B. This is the first known study in the world of the VCGs of V. dahliae isolates from chrysanthemum.     

农杆菌介导的哈茨木霉T-DNA转化系统优化及拮抗能力突变子的性质分析

采用单因子试验方法研究了农杆菌EHA105介导的哈茨木霉Th-33转化过程中,各主要因素对转化效率的影响,建立了高效的转化系统,使农杆菌转化哈茨木霉的效率达到60～150个转化子/10^6个木霉孢子,利用该转化系统构建了含有8000多个转化子的T-DNA插入突变库。通过转化子与立枯丝核菌的对峙试验,从1260株转化子中筛选到23株拮抗能力发生变化的突变子。随机挑选5株突变子对其遗传稳定性进行分析,表明5株突变子都具有稳定性,聚合酶链式反应（PCR）表明上述突变子均有T-DNA片段的插入。     

体胚诱变结缕草属突变体形态特征及生长特性评价

对结缕草属3个种的119份体胚诱变突变体的13个外部形态特征及生长特性进行了相关分析。结果表明：突变体的所有13个性状的变异均较大,其中匍匐枝总长度、单株覆盖面积、叶毛及密度的变异系数均高于1。主成分分析结果表明,单株覆盖面积、匍匐枝总长度、密度以及直立枝节间长4个性状对结缕草属突变体的遗传多样性研究具有重要意义。在聚类分析基础上,将119份突变体种源划分为4组,分别为细叶多毛型突变体、粗径早绿型突变体、短叶少毛型突变体、宽叶晚绿型突变体。     

腺相关病毒介导的小鼠prnp基因打靶载体构建

利用三重融合PCR方法构建了小鼠prnp基因敲除载体。提取129小鼠基因组,设计引物扩增打靶载体同源臂,把两同源臂与neo基因三元件PCR扩增成一条融合基因。融合基因与AAV载体酶切后的载体骨架通过NotI酶切位点相连接,构建重组质粒载体rAAV。     

海滨雀稗突变体抗旱性的评价

以3个海滨雀稗(Paspalum vaginatum)品种(Sea Isle2000、Platinum、Supreme)及其经辐射诱变筛选出的7个突变体为试验材料,在干旱胁迫条件下通过测定叶片相对含水量(RWC)、叶片相对电导率(REC)、脯氨酸(Pro)含量、可溶性总糖含量(TSC)及叶片萎蔫系数等5个生理指标,综合评价其抗旱性。结果表明:干旱胁迫导致试验材料的RWC下降,叶片萎蔫系数、Pro、TSC、REC上升,但不同品种材料的变化幅度不同。突变体"PL-40-1"、"PL-40-2"、"SP-40-2"在干旱胁迫下,其RWC下降幅度显著低于对照,叶片萎蔫系数、Pro、TSC、REC的上升幅度均明显低于对照,说明突变体"PL-40-1"、"PL-40-2"、"SP-40-2"叶片的保水能力较强,抗旱性优于其亲本;而突变体"SI-50-1"、"SI-50-5"、"SI-60-6"、"PL-40-8"抗旱性不及其亲本。