斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。     

植物病毒标记胶体金探针的制备

对用于植物病毒标记的几类胶体金探针的制备及其标记技术进行了研究。比较了不同情况下胶体金探针的选择、制备与保存的关键技术环节,比较了提高标记强度与特异性的方法,并且对五种植物病毒进行了标记。     

(~(14)C-三唑基)-多效唑的合成

用相转移催化法标记合成了植物生长延缓剂1-对氯苯基-2-[(5-(14)~C)-1,2,4-三唑-1-基]4,4-二甲戊-3-醇((14)~C-多效唑)。其步骤包括在相转移催化剂PEG800的存在下,(5-(14)~C)-1,2,4-三唑与一氯片呐酮在乙酸乙酯溶液中反应,生成(5-(14)~C)-α-三唑基片呐酮,后者在苯溶液中再与对氯氯苄反应,生成(14)~C-三唑酮,最后在甲醇溶液中用硼氢化钠还原得到(14)~C-多效唑。其总放化收率为20.9％(以(14)~C-三唑计),放化纯度大于99％。     

石灰性土壤不同形态无机磷对作物磷营养的贡献

 应用蒋-顾石灰性土壤无机磷分级法、以原子反应堆和放射化学标记合成的Ca#-2- #+（32）P、Ca#-8-#+（32）P、Al-#+（32）P、Fe-#+（32）P盐直接标记石灰性旱地灰潮土壤中相应的磷酸盐的方法，评价了石灰性土壤中不同形态无机磷的有效性及对植物磷素营养的贡献。特别是对在石灰性土壤上，以往被人们忽视的Fe-P盐的有效性及贡献有了新的认识。研究表明，非晶质Fe-P盐的有效性与Al-P盐基本相当；不同形态无机磷酸盐有效性顺序为Fe-P≈Al-P>Ca#-2-P>Ca#-8-P；对植物磷营养的贡献大小顺序则为Al-P>Ca#-8-P>Ca#-2-P。二钙型磷酸盐有效性虽高于八钙型磷酸盐，但由于其含量少，对植物磷营养总的贡献却低于八钙型磷酸盐。至于石灰性旱地土壤中Fe-P盐对植物磷营养的贡献，非晶质Fe-P的有效性高，其贡献较大，而晶质磷酸铁盐的有效性及对植物磷营养的贡献还需进一步探讨。     

兔病毒性出血症Dot-IGSS检测方法的建立

[目的]建立一种检测兔病毒性出血症IgG抗体的斑点免疫金银染色法（Dot—IGSS）。[方法]选择抗原包被浓度20μg/ml,被检血清稀释度1：160;鼠抗兔IgG稀释度1：200、金标羊抗鼠IgG稀释度1：20的工作条件,用所建立的Dot—IGSS与血凝抑制试验（HI）对96头份被检血清进行平行检测。[结果]Dot—IGSS和HI的检测阳性率分别为94％和31％。[结论]所建立的Dot—IGSS是一种灵敏、特异和稳定的血清学捡测方法,适用于兔病毒性出血症的诊断和抗体检测。     

检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。     

Localization of potato leafroll virus in leaves of secondarily-infected potato plants

Potato leafroll virus (PLRV) antigen was localized by immunogold labelling in semi-thin leaf sections of secondarily-infected potato plants cv. Bintje. Viral antigen was present in all cell types of the phloem tissue. but occurred most abundantly in the companion cells. Detectable amounts of PLRV antigen were found only in the sieve elements in veins with a large number of infected companion cells. Occasionally, parenchyma cells were also found to be infected. PLRV was not exclusively limited to the phloem tissue in the infected potato plants, but was also found in mesophyll cells neighbouring minor phloem vessles. Spread of virus from cell to cell in the mesophyll was not observed. The distribution of PLRV in the potato leaf tissue has implication on its availability, for acquisition by aphids.     

甘蔗花叶病毒VPg蛋白的原核表达及其在玉米中的免疫定位

 利用RT-PCR方法从感染甘蔗花叶病毒北京分离株(SCMV-BJ)的玉米叶片中扩增得到VPg基因,将VPg基因连接到原核表达载体pET-28a上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,VPg在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子量为30 kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子获得了特异性较高的抗血清。ACP-ELISA测定抗血清的效价为1/4096。利用该抗血清对健康玉米和病毒侵染的玉米茎、叶脉和叶片进行免疫金标记,结果表明在茎和叶脉的韧皮部筛管的细胞壁处有金颗粒。     

(三唑基-~(14)C-)粉锈宁的标记合成

本文报道了(三唑基-14C)-粉锈宁的制备。由14C-甲酸和重碳酸氨基胍形成(5-14C)-3-氨基-1,2,4-三唑,再经重氮化脱氨得到(5-14C)-1,2,4-三唑,最后再与对氯酚和二氯片呐酮反应得到(三唑基-14C)-粉锈宁。放化收率为26％(从甲酸-14C计),放化纯度大于95％。