草莓根腐病拮抗真菌筛选鉴定及其防病促生作用

【目的】探索利用植物病、健株根域土壤微生物区系比较法快速筛选高效、广谱且有实际防病促生作用生防真菌的可行性。【方法】根据菌落培养与扫描电镜形态特征及rDNA-ITS序列对拮抗真菌进行鉴定;生长速率法测定菌株无菌发酵滤液的拮抗活性,盖玻片对峙培养法观察拮抗真菌对草莓根腐病原菌菌丝形态的影响;室内发芽试验法测定真菌无菌发酵滤液促种子萌发活性;采用盆栽试验研究拮抗真菌对草莓根腐病的防病促生作用;土壤稀释平皿分离法测定拮抗真菌的定殖能力及对草莓根域微生物区系的影响。【结果】经鉴定,2株拮抗真菌HF3和HF7分别为灰黄青霉（Penicillium griseofulvum）和土曲霉（Aspergillus terreus）,其无菌发酵滤液对7种供试病原真菌有较强的拮抗作用,培养96 h时,HF3对立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）菌丝生长抑菌率均为100.0%。HF3菌丝对大双孢柱孢（Cylindrocarpon macrodidyma CF9）菌丝具有溶解作用,使病菌菌丝出现扭曲、变细、断裂及原生质浓缩等畸变现象;HF3和HF7 103和104倍稀释无菌发酵滤液可促进甜瓜种子萌发及胚根、胚芽生长。HF7 104倍稀释液对西瓜种子萌发及胚芽、胚根生长具有促进作用;HF3和HF7对盆栽草莓根腐病的防效分别达53.0%和46.9%,同时可促进盆栽草莓植株生长,提高果实产量;菌株HF3和HF7在草莓根表定殖数量分别为2.23×105、1.02×105 CFU•g-1干土,同时减少了大双孢柱孢数量;接种HF3和HF7可有效调整草莓根域微生物区系,促进土壤微生态恢复平衡。【结论】通过植物病、健株根区土壤微生物区系比较可以快速筛选到高效广谱且有实际防病促生作用的生防真菌;HF3和HF7对草莓根腐病防治具有较高的潜在应用价值。     

桂枝主要活性物质对新余蜜橘青霉病抗性和防御体系的诱导

为探讨桂枝主要活性物质肉桂醛和肉桂酸对新余蜜橘青霉病的抗性及其机理,以500倍和1 000倍咪鲜胺稀释液为阳性对照,蜜橘损伤接种后,测定了防护效果最佳时肉桂醛、肉桂酸的抑菌浓度,分析了对果实活体防效和防御酶活性的影响。结果表明,25、8 mg/m L肉桂醛以及30、15mg/m L肉桂酸是最佳抑菌浓度;与对照组相比,各浓度药液处理均能显著降低病原菌的致病力,贮藏第6天,25、8 mg/m L肉桂醛处理组的病情指数分别为54.4%和66.4%,30、15 mg/m L肉桂酸处理组分别为49.6%和63.2%;各浓度药液处理均能降低新余蜜橘的MDA和H_2O_2含量,显著提高并维持SOD、PPO等防御酶的活性,以25 mg/m L肉桂醛和30 mg/m L肉桂酸处理效果最佳。研究表明,肉桂醛和肉桂酸能有效增强果实活体防护效果以及诱导果实的抗病性,且抗性的产生可能与果实内相关防御酶活性提高有关。     

扩展青霉拮抗细菌发酵液在苹果保鲜中的应用

从水果果皮上筛选出2株对扩展青霉有拮抗作用的枯草芽孢杆菌T3与T8,其发酵液在平板上对扩展青霉有较强的抑制作用。将这2株拮抗菌的发酵液应用于苹果的保鲜上,结果表明,拮抗菌T3与T8发酵液能在活体上抑制扩展青霉病斑的扩大,在接种后第6天抑制率分别为51%与46%。还研究了拮抗菌发酵液、扑海因、壳聚糖分别单独使用对贮藏苹果可溶性固形物、抗坏血酸含量、可滴定酸度和失重率的影响,分析比较它们在保鲜中的效果。结果表明,2株拮抗菌的发酵液可使贮藏苹果的可滴定酸度有一定程度的提高,分别高出对照50%与100%,而对其他指标影响不大。而壳聚糖与扑海因都能使贮藏期苹果的抗坏血酸含量保持较高水平,分别高出对照700%与180%,此外壳聚糖与扑海因对降低水果的失重率也有一定的作用,失重率分别比对照低20%和32%,但它们对苹果的可溶性固形物的影响与对照相比并不明显。     

Real-time PCR法定量检测柑橘绿霉病菌对抑霉唑的抗性频率

 抑霉唑被广泛用来防治由指状青霉菌(Penicillium digitatum)引起的柑橘绿霉病。已有研究表明,柑橘绿霉病菌对抑霉唑的抗性由CYP51基因启动子区5个126-bp转录增强子的简单串联重复和126-bp转录增强子上199-bp的特异性片段插入所引起。基于这2种抗性分子机制,通过设计特异引物和优化条件,建立real-time PCR高通量分子检测技术,用于快速检测柑橘包装贮藏库中绿霉病菌群体对抑霉唑的抗性频率F_R,指导科学用药。     

鹅源草酸青霉发酵鸡粪工艺的研究

为了利用微生物发酵鸡粪生产高质量的有机肥料,为鸡粪资源的合理利用和减少环境污染提供有效的解决途径。本文以从五龙鹅肠道分离的草酸青霉为发酵菌株,通过对鹅源草酸青霉发酵鸡粪生产生物肥料和减少环境污染的研究,来探讨发酵鸡粪的工艺条件。结果表明：利用草酸青霉为发酵菌株发酵鸡粪,使鸡粪中的氮、无机磷、有机质的含量分别提高12.13%、74.7%、15.6%;粗纤维的含量降低39.15%;氨气浓度降低了55.12%;发酵后的鸡粪大肠杆菌菌值为0.04,明显高于未发酵鸡粪（0.0004）;寄生虫卵死亡率为96%。通过正交优化试验确定的发酵鸡粪的工艺为：氮增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1：2,料层厚度为45cm,发酵温度为32℃;无机磷增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1：2,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃;氨气浓度降低幅度最大时的发酵时间为60h,料水比为1：3,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃。     

New Polyketides from Mangrove Endophytic Fungus Penicillium sp. BJR-P2 and Their Anti-Inflammatory Activity

Four new polyketide compounds, including two new unique isocoumarins penicillol A (1) and penicillol B (2) featuring with spiroketal rings, two new citreoviridin derivatives citreoviridin H (3) and citreoviridin I (4), along with four known analogues were isolated from the mangrove endophytic fungus Penicillium sp. BJR-P2. Their structures were elucidated by extensive spectroscopic methods. The absolute configurations of compounds 1–4 based on electronic circular dichroism (ECD) calculations, DP4+ analysis, and single-crystal X-ray diffraction are presented. All the new compounds were evaluated for anti-inflammatory activity. An anti-inflammatory assay indicated that compound 2 inhibited lipopolysaccharide (LPS)-induced NO production in RAW 264.7 cells, with half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) values of 12 μM, being more potent than the positive control, indomethacin (IC₅₀ = 35.8 ± 5.7 μM). Docking study showed that compound 2 was perfectly docking into the active site of murine inducible nitric oxide oxygenase (iNOS) via forming multiple typical hydrogen bonds.     

真空处理对青霉菌的抑制及吸湿性能影响研究

接种青霉菌橡胶木在温度15 ℃、绝对真空度7 mmHg(即933 Pa)下,分别处理0、12、24、36、48、60、72 h。经霉菌稀释计数观察青霉菌数量,傅里叶变换红外光谱、热重分析仪和动态水蒸气吸附分析仪分析橡胶木表面化学结构、热稳定性与吸湿解吸性能。结果表明,真空处理可明显抑制青霉菌生长,处理60 h,青霉菌几乎完全被杀死;接菌橡胶木与真空处理接菌橡胶木,其纤维素、半纤维素和木质素均有所降解,橡胶木表面亲水基团增加,表面亲水性增强,且后者易炭化,热稳定性能稍有降低;侵染青霉菌的橡胶木吸湿与解吸性能有所增大,真空处理后更趋明显。该研究可为真空处理抑制木材霉菌生长技术提供理论参考。     

梅林青霉液态发酵生产纤维素酶条件的研究

研究不同培养条件对梅林青霉液体发酵产纤维素酶的影响,为此对不同碳源、氮源、pH、培养温度、摇瓶转速和摇瓶装量、发酵时间培养条件下羧甲基纤维素酶、滤纸酶、β-葡萄糖苷酶活力进行了测定。结果表明,碳源麦麸诱导效果好于稻草、玉米秸、羊草;氮源中尿素明显降低β-葡萄糖苷酶活力,豆饼、硝酸钠和蛋白胨之间影响不明显;28℃和pH5.0是产纤维素酶最佳温度与酸碱度;通过响应面与等值线分析可知,在摇床转速170~180 r.m in-1,摇瓶装量30~40 mL时,羧甲基纤维素酶、β-葡萄糖苷酶显示较高活性;摇床转速140~150 r.m in-1,摇瓶装量40~50 mL时,滤纸酶显示较高活性;梅林青霉在Bioengineering的NLF19生物反应器液体发酵大约11 d时3种酶活力达到最高。     

赭绿青霉 Sp1菌株木聚糖酶最佳产酶条件及部分酶学特性研究

[目的]从土壤中分离筛选获得了一株具有高产木聚糖酶能力的真菌Sp1.[方法]经过28S rDNA测序鉴定为赭绿青霉(Penicillium ochro-chloron ).通过对摇瓶发酵条件优化试验及酶特性研究.[结果]该菌株的最适产酶条件为:2;(W/V)粗制木聚糖+0.5;葡萄糖为碳源,0.44; KNO3+0.06;蛋白胨为氮源,发酵起始pH为5.0,150 mL三角瓶装液量为40 mL,转速为220 r/min,28 ℃下培养72 h木聚糖酶酶活可达387 U/mL.将菌株Sp1发酵所得粗酶液经过纯化后研究其酶学特性,酶最适反应pH为4.0,最适反应温度为55 ℃,在40 ℃,pH 2.2～6.0,酶活性稳定.终浓度为0.01 mol/L的Na+ 、K+ 和Zn2+ 对酶活有促进作用.[结论]所筛选的Sp1菌株具有较好的应用前景.     

油茶产黄酮内生真菌的初步研究

试验通过对前期从油茶中分离出的内生真菌进行液体发酵培养、浓缩发酵液等操作获得菌株的次生代谢产物,继而通过盐酸-镁粉颜色反应初筛和薄层层析法复筛,得到2株具有产黄酮能力的内生真菌。这2株内生真菌经形态学鉴定分属于青霉属(Penicillium)和链格孢属(Alternaria),并测得发酵液中的黄酮含量分别为0.011 3和0.013 5 mg/m L。