枯草芽孢杆菌CCTCC M207209抗扩展青霉特性研究——活性物质的提取、稳定性与应用

【目的】考察枯草芽孢杆菌CCTCC M207209抗扩展青霉活性蛋白在不同条件下的稳定性,评价其对苹果扩展青霉污染的抑制作用,为该菌的实际应用提供理论依据。【方法】在确定出最佳硫酸铵饱和度的基础上,用50%的硫酸铵饱和度沉淀发酵液中的活性蛋白,将所得粗蛋白用pH7.0的磷酸盐缓冲液溶解,用截留分子质量为8.0～10.0 ku的透析袋透析后,分别在121℃下处理30 min、经不同pH及0.05 mol/L不同金属离子处理8 h和紫外线照射不同时间后,用杯碟法测定其对扩展青霉的抑菌活性;在接种有15μL扩展青霉孢子悬液的苹果上分别接种30μL蛋白提取物、混合液体发酵物、无菌体发酵液和121℃灭菌30 min的带菌体发酵液,28℃培养7 d后,观察各孔处的发病率,并测量接种处病斑直径。【结果】提取发酵液中抗扩展青霉活性蛋白的最适硫酸铵饱和度为50%;粗蛋白提取物的抑菌活性在121℃处理30 min后无减小;pH为7时蛋白稳定性最高,处理8 h后抑菌活性无降低;紫外线照射前3 h,蛋白活性迅速降低,此后变化较小;不同pH和紫外线照射8 h后,蛋白的活性保持率均大于50%;0.05mol/L的Na+和Mg2+对抑菌活性有促进作用,Ca2+、Zn2+和Fe3+则使其完全失活。含菌体(1×108/mL)发酵物能够完全抑制低含量扩展青霉(1.5×105/mL)对苹果的侵染,活性蛋白可将其在苹果上的侵染率降低至55.6%,并可有效抑制其在苹果中的生长。【结论】枯草芽孢杆菌CCTCC M207209所产抗扩展青霉活性蛋白在广泛的pH、紫外线、温度条件下,具有良好的稳定性,能够有效抑制扩展青霉对苹果的侵染,在防治大田及采后苹果贮藏过程中扩展青霉的污染方面,有很好的应用前景。     

柑橘绿霉病菌拮抗放线菌MY-5的筛选与鉴定

从广东省各地区水果园和蔬菜地采集土壤23份,采用稀释平板法分离获得放线菌212株。以柑橘绿霉病菌为目标菌,采用抑菌带测定法,筛选获得9株具有拮抗活性的菌株,其中菌株MY-5拮抗活性最强,抑菌带宽达18.67mm,同时对其它13种果蔬采后病害也有较强的拮抗作用。通过对菌株MY-5形态观察、培养特征、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为链霉菌属吸水类群（Streptomyces hygroscopicus）。     

扩展青霉拮抗菌的筛选鉴定及其发酵液的抑菌效果

从水果表面及土壤中分离到几十株细菌,通过平板筛选到6株拮抗效果较好的拮抗菌,其中2株拮抗菌T3和T8的发酵液对扩展青霉（Penicillium expansum）表现出显著的拮抗效果。本实验对该两种菌的发酵液的抑菌作用进行了初步的研究。这两株拮抗菌T3和T8的发酵液稳定性表现出不同,分别用100℃高温或两种蛋白酶处理后,T3菌株的发酵液抑菌效果均有一定程度的下降但仍表现出较高的活性,而T8菌株的发酵液在100℃高温处理后,抑菌活性下降但仍保持部分活性,但用蛋白酶处理,其抗菌活性几乎丧失。T3与T8发酵液的抑菌活性在培养2天后几乎达到最大,T3的最适发酵培养基为BPA,T8的最适发酵培养基为PDA。两株菌的发酵液处理扩展青霉菌的菌丝后,引起菌丝畸形,原生质凝缩,出现空泡。根据细菌16SrDNA序列分析及其形态特征和生理生化特性,初步鉴定T3和 T8均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),两株菌之间基因序列的相似性为93.45%。     

灰绿青霉Penicillium glaucum NS3的诱变育种

以发酵条件优化的菌株Penicilliumglaucum NS3为出发菌,采用紫外线、亚硝酸钠复合诱变,在UV（15W、距30cm辐照9min）、0．3％亚硝酸钠协同诱变条件下,经多轮反复诱变,得到茵株Penicillium glaucum NS3e1,其发酵液CMC酶活和滤纸酶活分别达到400．07IU／mL和9．47IU／mL,比出发茵酶活309Iu／mL和7．37IU／mL分别提高29．47％和28．35％。     

Effect of hot acetic acid solutions on postharvest decay caused by Penicillium expansum on Red Delicious apples

The objective of this research was improvement of apple hot water treatment efficiency by using acetic acid. The apples (cultivar Red Delicious) were treated using hot acetic acid solutions (1, 2 and 3%) at 50 °C for 1, 2 and 3 min. The results of in vitro study showed that treatment with acetic acid at 50 °C can significantly reduce the growth of Penicillium expansum spores. The treatment of apples with 50 °C acetic acid solutions, in particular 2% acetic acid solution for 3 min or 3% acetic acid solution for 2 min, had significant impacts in reducing the extent of decay of the fruit during the short time storage experiment, while this effect was not significant in the long-time storage.     

柑橘绿霉病菌木聚糖酶基因(PdXY2)功能初步研究

柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum)是引起柑橘储藏期腐烂最主要的病原之一,严重影响了柑橘产业发展。本试验克隆了柑橘绿霉病菌的木聚糖酶基因(PdXY2),对其表达进行研究,在柑橘发病过程中,PdXY2的表达显著升高,至48h达到最高,其表达量为对照的4倍。为进一步明确PdXY2基因功能,构建了PdXY2基因缺失突变株(ΔPdXY2),ΔPdXY2突变株的致病性与野生型相比没有明显差异。由此我们推断,在柑橘绿霉病菌侵染柑橘的过程中PdXY2有一定的作用,但是单一缺失木聚糖酶PdXY2基因不能影响其致病性。     

高产核酸酶菌株的分离、筛选与诱变育种

为获得具有自主知识产权,满足生产需求的高产核酸酶P1的菌株。以2%RNA作为唯一碳、氮源的筛选培养基,从桔园土壤中初步筛选出65株具有产生核酸酶P1的菌株。结果表明：以其中酶活较高的YC34号菌株为出发菌株,该菌株的初始酶活性为127.3 U/mL,通过紫外诱变、微波诱变、LiCl诱变3种方式依次进行复合诱变处理后,获得酶活最高的突变株YC34-1,其粗发酵液的酶活达到360.7 U/mL,较原始出发菌株酶活增长了183.3%,具有良好的应用开发潜力。经初步形态学鉴定该菌株可归属为青霉属柑桔青霉(Penicillium citrinum)。     

Six New Polyketide Decalin Compounds from Mangrove Endophytic Fungus Penicillium aurantiogriseum 328#

Six new compounds with polyketide decalin ring, peaurantiogriseols A–F (1–6), along with two known compounds, aspermytin A (7), 1-propanone,3-hydroxy-1-(1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydro-2,5-dihydroxy-1,2,6-trimethyl-1-naphthalenyl) (8), were isolated from the fermentation products of mangrove endophytic fungus Penicillium aurantiogriseum 328#. Their structures were elucidated based on their structure analysis. The absolute configurations of compounds 1 and 2 were determined by ¹H NMR analysis of their Mosher esters; the absolute configurations of 3–6 were determined by using theoretical calculations of electronic circular dichroism (ECD). Compounds 1–8 showed low inhibitory activity against human aldose reductase, no activity of inducing neurite outgrowth, nor antimicrobial activity.     

用于虫生真菌遗传转化的苯菌灵抗性菌株筛选

发展虫生真菌的抗药性是协调生防与化防,稳定真菌杀虫剂应用效果的一个重要策略。本研究从代表性地区采集植物病原样本,分离得到35株菌株,鉴定为3属5种,即灰葡萄孢霉Botrytis cinerea、扩展青霉Penicillium expansum、指状青霉Penicillium digitatum、长柄链格孢菌Alternaria longipes和茄链格孢菌Alternaria solani。应用菌落直径法测定其对苯菌灵的抗性,结果表明：供试的11株灰葡萄孢霉菌株中,最高EC50为936.2670μg·mL^-1;12株青霉属菌株中,最高EC50为0.0384μg·mL^-1;12株链格孢菌株中,最高EC50为703.5557μg·mL^-1。其中灰霉和链格孢属菌株中有4株EC50大于600μg·mL^-1的高抗菌株,即灰葡萄孢霉的菌株SD2和SD1以及茄链格孢的菌株CC2-2和LF1-2,这4株菌株可作为遗传转化抗性基因克隆的基础材料。