番木瓜抗PRSV突变的抗病性鉴定

通过接种PRSV Ys、Vb和Sm3个株系及田间诱发鉴定,研究了抗PRSV突变岭抗1号（聪1）的抗病稳定性。结果表明,LK-1表现出高抗PRSV-Ys和PRSV-Vb2个株系的能力,对PRSV．Sm株系则无明显抗病能力,抗病性不因自交繁殖而丧失,种植到田间的接种苗成株期的田间抗性表现与苗期表现基本一致,表明LK-1的抗病性能具较高的稳定性。     

原核表达的PRSV HC-Pro 基因同源dsRNA 诱导番木瓜抗性的研究

 利用番木瓜环斑病毒（PRSV）HC-Pro 基因3′端824 bp 区段,通过OZ-LIC 法构建了含有PDK 内含子的发夹RNA 编码结构,并选用pSP73 和M-Jm109LacY 分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA 原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG 诱导表达的dsRNA 不被DNase I 和RNase A 降解,稳定性较好。采用喷洒dsRNA 粗制品的方式对番木瓜植株进行保护性处理和治疗性处理,症状观察及ELISA、Real-time RT-PCR 分析结果表明,保护性处理能有效诱发对番木瓜环斑病毒的抗性（发病率低,发病时间晚）;治疗性处理（植株已接种PRSV 25 d）能在处理初期引起番木瓜环斑病毒积累量发生短暂降低。     

用RT-PCR检测PRSV在番木瓜体内的运转

以抗病突变体岭抗1号与穗中红番木瓜为试材,人工接种PRSV-Ys株系,应用RT-PCR技术检测PRSV在体内的运转.结果表明,感病品种穗中红接种后24 h,即可在接种叶的未接种部位检出病毒,第10 d在接种植株的各部位均可检出病毒;而在岭抗1号植株上,接种后直至第10 d,仍未能在其他部位检测出病毒,表明岭抗1号具有阻碍病毒运转的能力.     

番木瓜美中红品种体胚转化体系的建立

利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。     

抗环斑型花叶病毒病番木瓜新品种选育研究初报

用本地番木瓜品种(类型)与新引进的国外品种哥仑比亚(Colunbia)杂交获得杂交后代(F1),从中选择抗病植株再与抗病株系岭南1号杂交,初步选育出钟村1号等3个具丰产优质果实特性的优良抗病类型。接种试验及田间观察结果表明,钟村1号对3个株系病毒抗性均表现出较高水平,发病轻微,具有较强而稳定的水平抗病性。     

番木瓜抗PRSV突变体的抗病性遗传分析

人工接种PRSV病毒Ys、Vb和Sm 3个株系,分析了番木瓜抗病突变体岭抗1号(LK-1)和美中红(MZH)的杂交后代的抗病性遗传特性,结果表明,F2代对PRSV Ys和Vb株系的抗病表现为由一对基因控制的质量性状遗传,感抗分离比例为3∶1,BC1代感抗分离比例为1∶1,抗病为隐性,感病为显性,表明岭抗1号具对PRSV株系专化性的隐性抗病基因,将该隐性抗病基因暂命名为rys基因。     

西瓜PRSV-W和ZYMV-CH抗性的遗传与连锁分析

番木瓜环斑病毒西瓜株系（PRSV—W）和小西葫芦黄化花叶病毒中国株系（ZYMV—CH）是危害我国西瓜的主要病害。以抗病毒病西瓜野生种质P．I．595203与感病普通西瓜自交系98R为亲本，采用单粒遗传方式得到109个F3代株系。分别对亲本、F1及F3代109个株系群体进行了苗期抗PRSV—W和ZYMV—CH接种鉴定，通过F3代群体的抗感分离情况来推测F2代单株的基因型，并分别对PRSV—W与ZYMV—CH抗性遗传及其这2个抗性基因的连锁关系进行分析。研究结果发现P．I．595203对PRSV—W的抗性是由单隐性基因控制，同时可能存在微效修饰基因，将此基因暂定名为prs—W；同时进一步证实了西瓜对ZYMV—CH的抗性由单隐性基因zym-CH控制，zym-CH和prs-W2个抗性基因在遗传上存在一定连锁关系，其遗传距离是27cM。     

基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证

根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。实验结果显示:转基因株系474为单拷贝插入的杂合子,插入位点在第7号染色体supercontig_61的717 141位置;抗病毒试验中,在接种病毒后28 d内非转基因株系1280有高浓度的病毒积累并很快表现出明显的病症,而转基因株系474基本无病毒积累且无发病症状。表明转基因株系474具有较好的PRSV抗性,有待于进一步田间试验。     

MicroRNA用于创制抗PRSV番木瓜新种质的展望

微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物体内调控基因表达的一类非常重要的小分子RNA,在植物逆境适应过程中发挥着重要的作用。总结番木瓜环斑病毒(papaya ring spot virus,PRSV)致病机理研究的最新进展,探讨miRNA在植物抗病毒中的研究进展和应用前景,提出研究番木瓜miRNA参与抗PRSV机制的途径,为开展番木瓜miRNA研究和创制抗PRSV番木瓜新种质提供理论参考。