SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的克隆和序列分析

以睾丸总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠和BALB/c小鼠的叠朊蛋白(PRND)基因,并将其克隆到pMD18-T载体中进行测序,运用生物信息学软件对这些序列进行了分析。结果表明获得的SD大鼠和BALB/c小鼠PRND基因的完整ORF片段,基因无内含子,分别编码178和179个氨基酸的前体蛋白。与GenBank登录的其他同品种鼠相应序列进行比较,SD大鼠发生了G187C点突变,相应地引起了G63R的氨基酸改变;BALB/c小鼠发生了G12T、C13G和C528T点突变,但只发生了L5V的氨基酸改变,其余均为同义置换。氨基酸一级结构分析显示2种PRND编码的Dopple蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚定结合区组成。二级结构预测表明,Dopple蛋白由3个α-螺旋和2个β-折叠片层组成。研究结果为进一步研究Dopple蛋白的结构、功能及其在传染性海绵状脑病发生发展中的作用提供了基础数据。     

猪捷申病毒HB株的分离与全基因序列分析

为分析河北省某规模化猪场猪捷申病毒(PTV)的遗传变异和进化关系,作者成功分离到PTV HB株,对其进行了毒力测定和动物回归试验,设计引物进行了全基因序列测定,并与国内外42株PTV全基因序列进行了同源性比较。结果表明猪捷申病毒HB株病毒滴度为10-6.4 TCID50.mL-1,健康仔猪接毒28d后均出现明显猪捷申病症状,该毒株全基因组序列长度为7 090bp。系统进化树分析表明,猪捷申病毒HB株(JQ664746)属于PTV-8型血清型,和国内分离的PTV-jilin/2003株(GQ293092)同源性最高,从而为进一步研究该毒株的遗传变异提供参考。     

Cloning and function analysis of MvP5CS in Medicago varia xinmu-1

为研究苜蓿（Medicago sativa）耐盐分子机制，为抗逆分子育种提供依据，通过同源克隆和RTPCR技术克隆了新牧一号杂花苜蓿（M．varia Xinmu-1）的MvP5CS基因，MvPSCS全长2148bp，Genbank登录号为：EU371644。荧光定量PCR分析发现，在盐胁迫下MvPSCS基因表达明显上调，说明MvP5CS与苜蓿的耐盐性相关。利用农杆菌介导的叶盘转化法。将MePSCS基因成功转入烟草（Nicotiana tabacum），盐胁迫下转MvP5CS基因T1代烟草萌发率和根长均高于非转基因烟草．表明新牧一号首蓿P5CS基因能够据高转基因烟草的耐盐性。     

牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株E0基因的克隆与抗原表位预测

根据GenBank上发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) Oregon C24V株E0基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增BVDV HB-DCZ株E0基因.将PCR产物克隆到pMD18-T载体,克隆产物进行序列测定与分析.结果显示,HB-DCZ cDNA体外扩增获得特异性条带,约为687 bp.序列测定结果表明,HB-DCZ株E0基因由681个核苷酸组成,编码227个氨基酸.与已公开发表的BVDV其他毒株核苷酸和推导氨基酸序列同源性相似顺序依次为:CCSYD 99％和98.7％、QHZK10 98.4％和97.8％、VEDEVAC 98.2％和97.8％、Oregon C24V80.9％和89.9％、Yak 74.2％和81.1％.HB-DCZ与CCSYD、QHZK10以及VEDEVAC株的遗传距离较近,与国际标准毒株C24V、Yak株的遗传距离较远.运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,采用Karplus-Schulz方案预测蛋白质的柔性区域,按Jameson-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性.对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N-端6～17、23～29、47～53、59～68、70～81、97～109、114～122、127～134、137～143、165～172、186～198和213～220.     

乳清酸蛋白基因调控序列的鉴定及转基因小鼠乳腺表达G-CSF载体的构建

乳清酸蛋白基因经亚克隆、酶切鉴定，并对该基因５′区进行克隆和序列分析，在核实序列正确后，构建了以其为调控序列、指导人Ｇ－ＣＳＦ基因的真核表达质粒，以用于转基因动物乳腺表达研究。     

一步获取基因定点修饰技术测序样品双峰中突变序列方法的建立

介绍了一种经济高效获取突变序列的方法。该方法克服了传统的基因定点突变样品双峰测序峰图分析工作量大、操作繁琐、结果判定周期长等问题,通过与野生型序列的对比分析,判定突变类型,直接获取突变型基因序列,从而为基因定点突变技术中快速筛选、确定阳性样品及其研究奠定理论基础。     

淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析

典型的主要组织相容性复合体(MHC)是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了分析。结果显示,淮南麻黄鸡MHCⅠα分子高度多态,但主要集中在α1和α2区域,该区变异氨基酸位点共68个,其中高度变异22个。淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域氨基酸序列同源性介于79.3%~99.5%之间,仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源性与鸭较高,介于57.6%~64.1%之间;其次为人和鼠。进化分析显示,淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域分属于两个类群,但未显示明显的品种差异。此外,鸡与鸭的亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。研究结果表明,淮南麻黄鸡MHC分子在进化过程中呈现高度的多态性,但受到病原体的选择压力,多态性主要位于抗原肽结合部分的α1和α2区域。     

鸡传染性喉气管炎病毒WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

根据传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列,分别与ILTV SA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99.7%和99.1%,但与其它α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低,低于3.0%。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第10 d～60 d内均能检测到ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究,ILTV WG株ICP4基因的克隆和序列测定,以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达,为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。