马尾松亲本遗传距离与子代生长性状相关性分析

利用ISSR标记分析了马尾松测交亲本遗传距离与11年生子代生长性状的相关性,发现亲本遗传距离在0.158 - 0.657范围时与子代各生长性状的相关性较低,而当遗传距离在0.264 - 0.529区间时与子代胸径、材积性状的相关系数分别为0.493和0.469, 一元线性回归拟合效果均达显著水平,表明随着亲本间遗传距离的增大,马尾松胸径、材积等性状呈显著线性增加。当遗传距离位于0.357 - 0.529区间时,遗传距离与生长性状的相关系数比其在0.264 - 0.529区间时的相关系数增加,与材积性状相关系数为0.635。本研究证实马尾松亲本间ISSR分子遗传差异对于子代生长预测和杂交亲本选配具有一定参考价值,但由于相关系数较小,尚不能提供决定性作用,而在本研究基础上建立更完善的分子标记实验模型,将利于有效进行马尾松杂种优势辅助聚合。     

湖北麻城杜鹃古群落遗传多样性研究

湖北麻城杜鹃是迄今发现的我国最大的古杜鹃原始群落,它不但具有重要的经济观赏价值,而且具有重要的研究价值。利用ISSR分子标记技术对湖北麻城龟山景区的杜鹃古群落遗传多样性进行了初步分析。14个多态引物共检测到182个位点,其中多态位点144个,多态位点百分率为79.12%;平均有效等位基因数为1.470 8个,平均Nei's基因多样性为0.289 3,平均Shannon信息指数为0.447 5,表明该景区杜鹃的遗传多样性较高。     

火龙果ISSR优化体系的建立

为建立稳定的火龙果ISSR-PCR反应体系,采用单因素与正交设计试验相结合的方法,对ISSR反应体系中的主要因素进行了优化筛选。结果表明,20μL ISSR反应体系中各主要成分的最适浓度分别为10×Buffer(含Mg2+)2.0μL,DNA 20.0ng、0.30mmol.L-1 dNTP、引物0.35μmol.L-1、Taq DNA聚合酶为1.5U,引物(AC)8T的最佳退火温度为54.0℃。利用优化得到的体系对6份火龙果材料进行检验,结果表明优化后的体系适合火龙果的ISSR-PCR反应。     

运用ISSR分析蜂螨对雄蜂及雄蜂蛹的选择性寄生机制

以被大蜂螨(Varroa destructor)寄生的意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)为实验材料,分别采集有螨雄蜂、无螨雄蜂、有螨雄蜂蛹和无螨雄蜂蛹各40只,运用ISSR(inter-simple sequence repeat)标记对各样品进行DNA扩增,通过fine-dox3型凝胶成像系统分析各条带的片段大小,计算各特异性条带在有螨与无螨样品中的概率.结果表明:有些特异性条带在有螨与无螨样品中的概率差异极显著(P<0.01),由此推测,这些条带可能与蜂螨的选择性寄生有关.     

栗蚕种群遗传多样性的ISSR分析

为了揭示栗蚕地理种群间的内在联系,利用ISSR技术对12个地理种群的栗蚕进行了遗传多样性分析。结果表明:20个ISSR引物共扩增326条谱带,其中276条具有多态性,多态性比率为84.66%。不同种群栗蚕间的遗传距离(D)为0.2577～0.4908,由UPGMA聚类分析软件绘制了分子进化树,发现遗传聚类与其目前的地理分布有密切的相关性,且已发生了遗传分化。     

香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增?鄄聚合酶链式反应（ISSR-PCR）的Taq酶用量、Mg²⁺浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为：总容积20 μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 μmol·L -1引物,1.625 mmol·L^-1 Mg²⁺,0.250 mmol·L^-1 dNTPs,10 × PCR buffer 2 μL。PCR扩增程序：94 ℃变性5.0 min;35个循环：94 ℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72 ℃延伸1.5 min;最后72 ℃延伸7.0 min,4 ℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12     

锥栗不同组织基因组DNA的提取及ISSR-PCR验证

为提供适宜的材料和保存时间,用于锥栗分子生物学研究,试验利用改良CTAB法,以锥栗不同保存时期下的叶片组织和锥栗的不同组织为材料提取总DNA。结果表明:随着保存时间的延长,锥栗基因组DNA浓度总体呈下降趋势,硅胶干燥法保存植物材料的最佳时期为10 d,保证较好提取效果的最长保存时间为10个月;各组织中,除坚果外,其他6种材料都能提取出DNA,尽管纯度和产量不同,OD260/OD280值都在1.8以上,电泳结果显示除坚果外其他材料中提取的DNA无降解。清晰明亮的PCR产物也表明所提取的DNA满足ISSR分析的要求,尤以锥栗嫩叶、成叶、叶芽和花序效果为佳。     

不同来源膏桐种子品质及ISSR分析

对不同来源的13个膏桐居群进行种子品质和ISSR分子标记遗传分析研究,结果表明:(1)各居群种子的百粒重、种仁含油率、种子含油率、蛋白质、淀粉及可溶性糖含量均差异显著(P0.05);PZH(攀枝花)居群种仁含油率(60.52%)和种子含油率(39.33%)均为最高,可作为高脂肪品种选育的亲本材料;YNE(印尼)的蛋白质含量(21.92%)最高,可作为高蛋白饲用品种选育的亲本材料。(2)利用9个ISSR引物对13个膏桐居群39份材料的遗传多样性进行分析,共扩增出74个位点,其中61个位点为多态位点,多态程度高达82.43%;材料间的遗传相似系数范围为0.30～0.95。UPGMA聚类分析结果表明:当以相似系数为0.73来划分时,39份材料可聚为11类,包括9个复合类和2个独立类。说明供试膏桐资源的遗传多样性水平很高。     

25个菊花品种遗传多样性的ISSR分析

为了摸清重庆地区的菊花品种的遗传关系,以便分类鉴定与生产运用,用ISSR-PCR技术对25个重庆地区主栽菊花品种的遗传多样性和亲缘关系进行了分析。从100条ISSR引物中筛选出10条引物分别对供试材料基因组DNA进行扩增,共扩增出242条带,其中多态性条带241条,多态性比率高达99.6%,表明供试材料在DNA水平上存在广泛差异。用NTSYS软件统计分析出供试品种的DICE相似系数界于0.331~0.718之间,应用根据UPGMA得出聚类结果,将25个品种分成4个类群,聚类结果与传统的形态学分类有些不同,可以看出ISSR标记技术能较准确地揭示出菊花品种的遗传多样性,它与形态学分类方法结合对菊花品种的分类研究会有很大推动作用。     

新疆籽用西瓜ISSR反应体系的建立及其遗传多样性研究

【目的】研究籽用西瓜遗传多样性,对籽用西瓜品种进行遗传多样性和聚类分析,为杂种选育提供一定的理论依据。【方法】以60份籽用西瓜种质资源为材料,对ISSR引物UBC801~UBC900进行筛选。【结果】筛选出多态性较好的ISSR引物10条。利用10条ISSR引物扩增60份籽用西瓜种质资源,共获得44个等位变异,每对引物检测到的等位变异数的变幅为3~7个,平均等位变异数4.4个。其中多态性条带为24条,10条ISSR引物的多态性信息含量(PIC)的变化范围为0.042 3~0.674 0,平均为0.358 2,遗传相似系数的变异范围为0.318~0.992,平均为0.779。利用UPGMA法进行聚类分析,新疆籽用西瓜分为6大组,第一组为材料47(40036),第二组为材料8(新籽瓜8号),第三组为材料10(红秀2号)、11(普通红大片)、12(新籽瓜4号)、13(紫荆红)、14(40002)、15(40004)、16(40008),第四组为材料7(新籽瓜1号),第五组为材料52(40045),其余的都归类为第六组。【结论】ISSR对籽用西瓜种质资源遗传多样性和亲缘关系确定相比其他分子标记更有优势,更为全面的基因组DNA信息,品种间较丰富的遗传多样性信息。利用ISSR标记分析60份籽用西瓜遗传多样性,参试材料来源、籽色、大小不同,亲缘关系差异较大,新疆籽用西瓜种质资源遗传多样性丰富。