石斛属部分植物SRAP-PCR反应体系的建立与优化

建立石斛属(Dendrobium)植物SRAP-PCR反应体系,为石斛的品种鉴定与分类提供理论和技术基础.采用单因素及正交试验对反应体系中的各因子进行优化,确定最优退火温度,并筛选有效引物.结果表明:适用于石斛属植物SRAP 最佳的反应体系为:Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq D...     

绵羊防御素(sBD-1)cDNA的克隆及其植物中表达载体的构建

为了获得在植物中表达的绵羊防御素 ,从绵羊舌表皮组织中分离提取总RNA ,经逆转录PCR (RT PCR)扩增出绵羊防御素sBD 1全长cDNA ,回收扩增产物连接到克隆载体 ,测序分析表明该cDNA为 2 1 5bp ,与报道序列完全一致。将该序列替换插入质粒PBI1 2 1中的GUS编码序列 ,构建植物表达载体PBIC 35SsBD1 ,为进一步进行转基因植物和绵羊防御素功能的研究奠定了基础。     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

结核变态反应阳性牛的非典型性分枝杆菌的分离与鉴定

本试验从６９头结核变态反应阳性牛中采取病料２０２份进行分枝杆菌，特别是非典型分枝杆菌的分离与鉴定，共获２６株分枝杆菌，除５株分枝杆菌外，其它全是非典型分枝杆菌。在这些非典型分杆杆菌中，５株偶发分枝杆菌，６株瘰疠分枝杆菌，５株鸟－胞内分枝杆菌，２株副结核分枝杆菌和１株ＲｕｎｙｏｎⅡ群。从病料看，有病变的分离率为４１．２％，无病变的为７．１％。在三种淋巴结病料中，以肠系膜淋巴结的分离率为最高，颌下淋巴     

检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用

根据GenBank上登录的犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）基因组全序列，选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4，并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3，用引物P1／P4进行RT—PCR，然后用引物P2／P3／P4进行复合套式PCR，建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应（RT—nPCR）的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段，与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT—nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明，有15份类似CDV强毒，5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT—nPCR可以有效检测CDV感染，能够将强、弱毒株区分开，可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。     

大庆市及周边地区非免疫猪群猪圆环病毒感染情况调查

为了解大庆市及周边地区猪群中PCV的感染情况,应用ELISA和PCR技术对采自大庆市5区4县及周边地区55个村屯/猪场未免疫PCV2疫苗猪血清样本649份,5家病猪场和6家屠宰场组织样本448套,进行血清学和分子生物学检查,并对检测结果进行了比较分析。结果显示,大庆市及周边地区未免疫PCV2疫苗猪血清样品PCV2抗体平均阳性率为54.70%,其中断奶仔猪样品阳性率为50.68%,育肥猪样品为70.00%,繁育母猪样品为54.70%。组织样品PCV1阳性率为4.46%,PCV2阳性率为22.32%。调查结果可为确定地区流行毒株序列提供原始材料和制定科学防控措施提供依据。     

蜜蜂消化道内含物乳酸菌群落组成的分析

从健康意大利蜜蜂肠道内经分离、纯化、培养,获得3株乳酸菌,对3株菌株进行菌落形态、革兰氏染色、生理生化特征研究,确定了3株乳酸菌中2株为乳杆菌;1株为双歧杆菌。     

应用RT／PCR—SSCP法分析传染性法氏囊病病毒的变异性

根据传染性法氏囊病病毒（IBDV）cDNA序列，在病毒VP2区域设计1对引物，应用RT／PCR－SSCP方法对4个不同时间及不同地域从传染性法氏囊病（IBD）病鸡法氏囊组织中分离的IBDV分离物进行了分析，发现4个IBDV分离物的SSCP图谱均存在明显差异，本试验表明，IBDV变异在我国普遍存在，SSCP方法可用于IBDV的变异性分析。     

Relationship between retinoic acid receptor alpha gene expression and growth-inhibitory effect of all-trans retinoic acid on canine tumor cells

Retinoids show antitumor effects on human acute promyelocytic leukemia and other tumors via retinoid receptors. In dogs, the role of retinoid receptors in inhibiting tumor development remains unclear. To evaluate the correlation between the degree of expression of retinoic acid receptor alpha (RARalpha) mRNA and the antiproliferative effects of all-trans retinoic acid (ATRA) treatments, expression analysis of RARalpha mRNA and cell growth inhibition assay were performed on 17 established canine tumor cell lines, including 6 mammary gland tumor (MGT) cell lines, 3 osteosarcoma cell lines, 5 melanoma cell lines, and 3 mast cell tumor (MCT) cell lines. Among the cell lines investigated, all 3 MCT cell lines showed high expression of RARalpha, and the most effective cell growth inhibition was observed in ATRA-treated MCT cell lines. However, remarkable antiproliferative effects of ATRA treatments were not observed on other tumor cell lines with moderate or low RARalpha mRNA expression. As a result of the relationship between RARalpha mRNA expression and ATRA treatment with regression analysis, statistically significant correlation was suggested. Furthermore, real-time quantitative polymerase chain reaction analysis of RARalpha was performed on MCT tissue samples of dogs with spontaneous disease, and 5 of 9 tissues showed high expression. These results suggest that ATRA may be an effective antitumor agent for MCT in dogs, and that prior measurement of expression of RARalpha mRNA may be a good indicator of the effectiveness of ATRA treatment.