适用于板栗疫病菌分子相互作用研究的双分子荧光互补系统

双分子荧光互补技术近年来已广泛应用于研究体内蛋白质相互作用。为建立适合于板栗疫病菌的体内蛋白质相互作用检测体系,本研究以质粒pCPXHY2和pCPXG418为骨架,构建了由板栗疫病菌pgd启动子控制的、以增强型黄色荧光蛋白EYFP为报告基因和以潮霉素和G418抗性为选择标记的双质粒系统pCPXHY2N155和pCPXG418C156。质粒pCPXHY2N155携带EYFP的1~155位氨基酸残基的编码序列,pCPXG418C156携带EYFP基因的156~239位氨基酸残基的编码序列。为验证该质粒系统的有效性,将板栗疫病菌异质三联体G蛋白的β和γ亚基基因分别与pCPXHY2N155上的N155和pCPXG418C156上的C156相连,获得重组质粒pCPXHY2N155β和pCPXG418C156γ。将这两个重组质粒共转化板栗疫病菌野生型菌株EP155,在转化株中观察到明显的黄色荧光,表明Gβ和Gγ在细胞中发生了相互作用。本研究所构建的双分子荧光互补系统,为今后研究板栗疫病菌分子相互作用提供了新的技术手段。     

板栗疫病与主要生境和经营因素的定量分析

应用数量化理论I模型分析板栗疫病与生境和经营因素的关系。复相关检验结果表明，板栗疫病发病率和感病指数两个数学模型均达到极显著水平；偏相关t检验表明，发病率同A层厚度、土层厚度、经营水平有紧密的相关性，与土壤质地有较紧密相关；感病指数同A层厚度、土层厚度、土壤质地有紧密的相关，与经营水平有或较紧密的相关。     

12种热带植物粗提物对胡椒瘟病的抑菌活性测定

用生长速率法测试了12种热带植物乙醇粗提物对胡椒瘟病菌的离体抑菌活性。结果表明，当供试质量浓度为干样10 mg/mL时，鹰爪和马缨丹粗提物对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑菌率均达到90%以上，分别为91.95%和94.32%。可见这两种植物粗提物对供试病原菌菌丝生长具有明显的抑制作用，值得进一步研究开发。     

烟草品种防御酶活性对黑胫病菌响应差异

 以不同抗、感黑胫病烤烟品种云85（高抗）、K326(中抗)、净叶黄（中感）和红花大金元（高感）为供试材料,采用人工接种方法研究了黑胫病菌诱导的这些品种超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性差异及其与品种抗性的关系。结果表明,接种黑胫病后不同抗性品种SOD,POD,PPO和PAL活性与对照相比均出现明显提高,抗病品种SOD和POD活性较感病品种上升快且维持较高活性水平,且抗病品种POD酶活高峰较感病品种出现得早;抗病品种PPO和PAL较感病品种活性上升幅度更大,维持时间更长。相关性分析表明,SOD,POD,PPO和PAL活性与品种的黑胫病抗性呈正相关关系。     

栗疫菌营养体亲和型多样性比较及野生栗栗疫菌交配型的分子检测

在北京周边县区、湖北大老岭山区以及陕西安康地区分别调查栗疫病发生情况,采集病原栗疫菌(Cryphonectria parasitica)菌株并进行营养体亲和性试验.结果表明:北京板栗栽培区和陕西安康地区野生栗栗疫病发病率较高,局部地区危害严重;湖北大老岭山区栗疫病发病率低,危害轻微.北京地区菌株群体营养体亲和型多样性指数(Shannon-Wiener's diversity index)极显著低于湖北菌株群体和陕西菌株群体,而陕西与湖北菌株群体营养体亲和型多样性指数差异不显著.随机选取湖北、陕西野生栗栗疫菌部分菌株,利用特异性引物,通过普通PCR和巢氏PCR,对其交配型进行测定,发现陕西与湖北野生栗菌株群体中均存在MAT-1与MAT-2两种交配型的菌株.通过PCR扩增,在两地的野生菌株群体里均发现同时具有两种交配型基因的菌株,其中,陕西群体此类菌株比例较大,湖北菌株比例较小     

Genetics of resistance to downy mildew in Brassica oleracea and breeding towards durable disease control for UK vegetable production

Downy mildew resistance was previously identified from screening a Brassica oleracea collection against two standard UK isolates of Hyaloperonospora parasitica. Sources of resistance were chosen from this material and developed further in this study by generating doubled haploid (DH) and inbred lines. Seedlings from the new lines were tested for resistance to a larger collection of H. parasitica isolates collected in 2001–2002 and 2007–2008 from the main broccoli and cauliflower production regions of the UK. Three lines (derived from borecole or summer cabbage) were broadly resistant to the pathogen isolates. Three of the remaining lines exhibited strong isolate‐specific resistance; several examples of weak or basal level of resistance to some isolates were observed. A new H. parasitica variant collected in 2008 was virulent in the broadly resistant lines, but was avirulent in a line with narrow specificity of resistance. The F₂ and BC₁ seedlings derived from outcrossing each of the three broadly resistant lines to susceptible broccoli and cauliflower lines segregated in a manner indicating that the resistance was controlled by a single dominant gene. No susceptibility was observed amongst F₂ seedlings derived from intercrossing the three resistant lines, indicating that they all share the same or closely linked broad‐spectrum resistance gene(s). DH lines were produced from F₁ plants, and resistant plants were further backcrossed to produce broccoli and cauliflower‐like lines that could be useful pre‐breeding material. A combination of resistance from lines with broad and narrow specificity is recommended for controlling downy mildew in UK brassica production.     

中国板栗品种对疫病的抗病性评价

通过在板栗离体枝条上接种栗疫病病原菌,对感染后的病斑进行观察,结果表明:不同板栗品种对疫病菌的感染程度不同,在供试的２１个品种和类型中,病斑较小的品种(类型)主要有北峪２号和兴隆城９号,其次为野生板栗、渤海所１８、燕魁、短花栗等７个品种和类型,以上品种抗病性较强,抗病性强的品种占供试品种的３３．３%;抗病性弱的品种有红光栗、怀黄、怀九等,抗病性弱的品种占取样量的３８．１%,以红光栗抗病性最弱,病斑面积显著地高于其它品种。不同生态品种群中均有抗性强的品种和抗性弱的品种。不同品种在感染病菌后对病菌的抗扩展能力不同:红光和怀黄品种的抗扩展能力最差,且病斑上病菌的分生孢子多;野生板栗的抗病性强,病菌侵染后有自愈现象;北峪２号和兴隆城９号感染病后病斑扩展速度显著慢于其它品种。通过试验把供试的品种分为抗性强品种、中度抗性品种。中度感病品种和抗性差的品种共４类。通过接种来源不同的毒性菌株,证明不同板栗品种对强毒性菌株的抗病性表现是一致的。     

栗疫菌(Endothia parasitica)致病毒素的初步研究

栗疫菌(Endothia parasitica)引起的板栗疫病是森林植物检疫对象之一。病原菌在侵染植物的过程中产生的毒素一向被认为是致病的重要因子。本实验以PD液体培养基为基础,通过震荡和静止两种培养方式,采用浸渍法和针刺法对板栗叶片和小枝进行了生物测定。研究显示板栗小枝和叶片可产生典型的症状,证明栗疫菌能产生具生物活性的毒性物质(毒素),PD培养液适于菌株的生长和毒素的产生。震荡培养比静止条件更利于产毒,浸渍法处理后第二天板栗小枝和叶片都表现典型的病斑和萎蔫症状,针刺法处理后第一天便表现出典型症状,说明针刺法比浸渍法效果更明显、叶片比小枝更敏感。