不同采收期异源引种柴胡有效成分的动态变化

为确定柴胡最佳采收期并为质量评价提供依据,研究3个不同引种柴胡不同采收期有效成分的动态变化。分别测定9个不同采收期柴胡的醇溶性浸出物、多糖、总灰分、总皂苷及皂苷a质量分数。研究表明:不同采收期3个柴胡品种醇溶性浸出物和总灰分质量分数均符合2010年版《中国药典》要求;辽宁柴胡多糖和醇溶性浸出物质量分数变化趋势类似,总体呈增长趋势,都在枯萎期11月质量分数最高;柴胡的总皂苷和皂苷a质量分数,除个别生长期内质量分数高低有所差异外,整体变化趋势基本相同,都呈先升后降来回波动的趋势,呈一定相关性。以总皂苷和皂苷a为主,结合醇溶性浸出物与多糖质量分数综合评价引种柴胡最佳采收期:甘肃和山西柴胡为8月下旬,辽宁柴胡为7月中旬。     

HPLC法测定烟台柴胡中柴胡皂苷a和d的含量

[目的]建立烟台柴胡中柴胡皂苷a、d含量的HPLC测定方法,研究烟台柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,为评价烟台柴胡品质提供科学方法。[方法]采用Thermo ODS-2 HYPERIL(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱;流速1 m L/min;柱温25℃;检测波长210 nm。[结果]方法学考察表明柴胡皂苷a、d的峰面积积分值和进样量的线性关系良好,精密度试验的RSD分别为0.67%和0.75%;加样回收率分别为99.4%和98.7%,RSD分别为1.53%和1.76%。不同来源的烟台柴胡中柴胡皂苷a、d的含量相当,总量在0.772%~1.079%。[结论]该方法稳定、重现性好、操作简单,可用于烟台柴胡的质量控制。烟台柴胡中柴胡皂苷a、d含量高于药典规定的柴胡标准,可以作为柴胡的药材新资源。     

茉莉酸甲酯和壳聚糖混合液对北柴胡种子萌发的影响

为促进大田栽培过程中北柴胡种子的萌发率,以北柴胡(Buplerurum chinense DC.)种子为试验材料,用不同配比的茉莉酸甲酯、壳聚糖混合液进行浸种24 h;以清水浸种作为CK,测定分析种子含水量、体积、发芽率及可溶性糖、可溶性蛋白、游离氨基酸含量等指标。结果表明:不同混合液浸种均有促进北柴胡种子萌发的作用。在发芽率最高的35 d,混合液处理后发芽率均显著高于对照,但T3和T4处理差异不显著,T3和T4与其他处理间差异显著;T2处理的种子含水量的最大相对变化率最大,T3和对照差异最小,除T3和对照外,其他处理间差异显著;体积呈现先下降再上升的趋势,且T4体积最大;可溶性糖含量整体出现下降-上升-下降-上升的波状变化;在种子萌发过程中可溶性蛋白质含量整体呈现减少趋势;到35 d时,CK和T3氨基酸含量比初始含量是增加的,而T1、T2和T4氨基酸含量比初始含量低。通过隶属函数分析进行综合评价,筛选出壳聚糖10 mg/m L与茉莉酸甲酯224.3μg/m L组合浸种效果最好,发芽率为54%;为北柴胡人工栽培过程中促进种子萌发效率提供参考。     

基于高通量测序的北柴胡根转录组SSR位点信息分析

以北柴胡根为试材,采用高通量转录组测序方法,获得uingene序列信息,研究分析SSR分布、基元特征,设计、验证EST-SSR引物的有效性,为开发、丰富EST-SSR分子标记奠定基础。结果表明：从北柴胡根转录组中共筛选到31 176个SSR位点,分布于21 732条unigenes,出现的频率为20.08%,分布密度为3.20个/10 kb,主要重复基元类型以二核苷酸最为丰富,共21 056个,占SSR位点总数的67.54%;其次是单核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR的19.05%和12.07%;四核苷酸～六核苷酸重复基元数量均较少。不同核苷酸基序类型共有131种基元,重复基元次数在5～11次的数量最多,占SSR总数的91.7%,且长度基本小于15 bp,其中AT/AT和AC/GT这两种基元在二核苷酸中出现频率最高。2 064条和1 004条含有SSR位点的unigenes分别注释到GO和KEGG通路,获得注释的基因功能主要与基础代谢相关。从22 090对具有潜在多态性的EST-SSR引物中,随机挑选20对引物对3个北柴胡种质DNA进行PCR扩增,扩增成功率最高达85%。北柴胡根转录组S...     

窄竹叶柴胡内参基因筛选及皂苷合成关键酶基因表达分析

窄竹叶柴胡(Bupleurum marginatum var.stenophyllum)为柴胡属多年生高大型草本植物，以根入药称为藏柴胡，具有较高的药用价值。本试验采用实时荧光定量PCR技术，利用geNorm、NormFinder及BestKeeper3种不同数据分析软件，从5个常用的候选基因(Actin,α-tubulin,β-tubulin,Cyclophilin,EF-1α)筛选出可在窄竹叶柴胡不同器官稳定表达的基因作为内参基因，并利用筛选得到的内参基因分析皂苷合成关键酶基因(HMGR,IPPI,FPS,SS,β-AS)在窄竹叶柴胡不同器官的相对表达量。结果表明β-tubulin基因可作为窄竹叶柴胡不同器官稳定表达的内参基因；皂苷合成关键酶基因在窄竹叶柴胡的不同器官中表达量有显著差异，IPPI基因在种子中表达量最高，其他基因在根中的表达量均高于在其他器官中的表达量，其中HMGR,FPS,SS在侧根的表达量高于主根。因此，窄竹叶柴胡各器官皂苷合成关键酶基因的表达量不同，最适内参基因为β-tubulin基因，本研究为窄竹叶柴胡分子生物学研究提供一定依据，促进其合理开发和利用。     

气相色谱法鉴别柴辛注射液中的柴胡

以己醛为标记物,采用气相色谱法对“柴辛注射液”中的柴胡进行了定性鉴别。通过筛选标记物和色谱柱、比较提取方法和进样方式、考察方法的专属性和耐用性等,对新建的鉴别方法进行了验证。验证结果表明,新建方法准确可靠,适用于“柴辛注射液”的质量控制。