hNIS和hTPO-1基因的同时克隆及测序

目的同时克隆人钠/碘同转运体(hNIS)和甲状腺过氧化物酶(hTPO-1)基因,为下一步共同转染肿瘤细胞介导放射性碘的摄取与有机化,延长放射性碘的停留时间,为治疗未分化甲状腺癌和非甲状腺癌提供更为有效的方法。方法运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),从人甲状腺组织总RNA中,同时全长扩增出hNIS和hTPO-1基因cDNA序列,并将它们分别克隆到pUCm-T载体上。结果与结论hNIS和hTPO-1基因cDNA,可同时成功克隆和测序。     

番鸭细小病毒弱毒株VP2基因的序列分析

将番鸭细小病毒强毒株MDPV－Q经番鸭胚传代，获得致弱株MDPV－26，应用PCR技术扩增MDPV－26株的VP2基因片段，将扩增后的VP2基因重组到pMD 18-T质粒载体上，并对插入片段进行序列测定，将测定结果及由该结果推导的氨基酸序列分别与MDPV－Q株及国外已发表的MDPV相应序列进行同源性比较及分析，结果表明，MDPV－26与强毒株MDPV－Q的VP2基因序列及与国外分离株均具有很高的同源性。     

规模化猪场粪污高效脱硫菌的分离、筛选与鉴定

为降解规模化猪场污水中的S^2-,本研究从规模化猪场采集粪便污水样品20份,首先接种于含10 g/L Na₂S的基础无机盐培养基中富集培养,然后涂布于分离培养基进行分离与纯化。对纯化的菌株采用对氨基二甲基苯胺分光光度法测定培养上清中S^2-含量,筛选菌株的脱硫能力。选择降解率较高的菌株进行生理生化鉴定和16S rDNA分子鉴定,并对扩增的序列进行同源性比较及进化树分析。结果表明:从20个样品中分离了14株菌株,筛选获得2株脱硫率较高的菌株JFF-2和JFF-3,脱硫率可达84.02%和86.12%;经16S rDNA序列分析表明,JFF-2菌与地衣芽孢杆菌的同源性为99.2%,JFF-3菌与粪产碱杆菌的同源性为98.7%,因此分别确定为地衣芽孢杆菌和粪产碱杆菌,与生理生化鉴定的结果一致。本研究获得了2株能够对畜禽粪便污水脱硫的菌株,为畜禽排泄物的进一步无害化处理提供了可能。     

顿河红豆草凝集素cDNA克隆与序列分析

利用RT-PCR技术从顿河红豆草含浓缩单宁的愈伤组织总RNA中分离克隆了凝集素cDNA.该cNDA包含完整的编码区和3’端非编码区,所编码的氨基酸序列与其它豆科植物凝集素具有较高的同源性。     

猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究

用F81细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒，经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT-PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒(FCV)，分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/02/2002与FCV／tiger/Shanghai／03/2002。人工感染猫可引起体温升高，口腔溃疡，食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列520bp长片段问的同源性为99.2％，与国内桂林虎分离株(TFCV9710)的同源性为74．0％，与国外分离株的总体同源性为58．1％，说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著，符合猫杯状病毒的分子生物学特征。     

鸽圆环病毒福建株全基因组序列分析

运用PCR技术从福建省某地发病信鸽组织中获得鸽圆环病毒（Pigeon circovirus,PICV）福建株（简称fj1株）全基因组序列,并对鸽圆环病毒福建株基因组核苷酸组成、结构及其遗传进行分析。结果表明,所获fj1株全基因大小2037 nt,包含有2个主要的开放阅读框（open reading frame,ORF）：ORF-V1（41～994nt）编码复制相关结构蛋白（the replicated-associated protein,Rep）,ORF-C1（1987～1166nt）编码核衣壳蛋白（the putative capsid protein,Cap）;在V1和C1的5＇端之间存在一个与圆环病毒滚环复制有关的高度保守的环状发夹结构。fj1株与GenBank登录所有鸽圆环病毒核苷酸同源性在84.5%～93.8%之间,与中国浙江鸽圆环病毒分离株zj1和zj2核苷酸同源性分别为88.7%和88.9%。从遗传进化上看,中国3株鸽圆环病毒均处在Cap蛋白起始密码子＂ATG＂分支,但分居不同亚群。     

新牧一号苜蓿MvP5CS基因的克隆和功能分析

为研究苜蓿（Medicago sativa）耐盐分子机制,为抗逆分子育种提供依据,通过同源克隆和RT PCR技术克隆了新牧一号杂花苜蓿（M.varia Xinmu 1）的MvP5CS基因, MvP5CS全长2 148 bp,Genbank登录号为：EU371644。荧光定量PCR分析发现,在盐胁迫下MvP5CS基因表达明显上调,说明 MvP5CS与苜蓿的耐盐性相关。利用农杆菌介导的叶盘转化法,将MvP5CS基因成功转入烟草（Nicotiana tabacum）,盐胁迫下转MvP5CS基因T1代烟草萌发率和根长均高于非转基因烟草。表明新牧一号苜蓿P5CS基因能够提高转基因烟草的耐盐性。     

家蚕微孢子虫烯醇化酶(Enolase)基因的克隆及序列分析与原核表达

烯醇化酶(enolase,ENO)是糖酵解途径的限速酶,对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)烯醇化酶的研究有助于了解微孢子虫的能量代谢机制。依据微孢子虫基因组数据库中的家蚕微孢子虫烯醇化酶编码序列设计引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得家蚕微孢子虫烯醇化酶基因(Nb ENO)。该基因ORF全长1 242 bp,编码413个氨基酸,预测蛋白质分子质量46.323 k D,等电点6.13;蛋白质二级结构主要由α螺旋(28.33%)、延伸片段(22.52%)和无规则卷曲(49.15%)组成,含有25个磷酸化位点和1个糖基化位点,无信号肽和跨膜结构域。系统进化树分析Nb ENO与蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)烯醇化酶基因序列(Nc ENO)的亲缘关系较近,序列比对显示二者的一致性为62.10%。将Nb ENO基因插入原核表达载体p ET-28a并转化大肠埃希菌Rosatta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后获得预期大小约50 k D的重组Nb ENO蛋白,有利于进一步研究Nb ENO的功能及亚细胞定位。     

CRISPR/Cas12a技术在动物疫病检测方面的应用

CRISPR/Cas系统是由簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)组成的一种基因编辑技术,可以特异地切割和识别靶标核酸基因。该技术具有检测速度快、灵敏度高和特异性强的优势,因此被广泛应用于动物疫病检测领域。本文就CRISPR/Cas12a结合等温核酸扩增技术和可视化技术在动物疫病检测中的应用进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为我国的养殖业和进境动物疫病的监测提供技术支撑。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离株的分子生物学鉴定

根据已有的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP) dsbE基因序列,合成了一对特异性引物,从3株APP分离菌(BZ1株,BZ2株和BZ3株)均扩增出预期342 bp的DNA片段.分别将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体中,构建重组质粒,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,提取质粒并进行序列分析.结果表明BZ1株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%～100%,BZ2株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因的同源性达98%～99%,BZ3株dsbE基因与所有14种血清型APP参考株dsbE基因同源性达97%～98%,证明3株分离菌均为APP.