自然寄生红火蚁病原真菌的分离、鉴定及其对红火蚁的致病力

对采自广州番禺区、南沙区,惠州和深圳市等地的红火蚁Solenopsis invicta虫体进行病原菌的分离与鉴定。致病力测定发现分离物PL对红火蚁有一定致病作用。采用单孢分离法获得PL菌株,形态学鉴定该菌株为淡紫拟青霉Paecilomyces liacinus。对PL菌株的10个分离株PL01~10进行致病力测定,结果表明,经1×108孢子/ml的浓度处理后第15d,菌株PL04处理的红火蚁累计死亡率最高,为70.60%。     

蝙蝠蛾拟青霉高产腺苷液体培养基优化

为了提高蝙蝠蛾拟青霉菌株RCEF0936腺苷的代谢量,以腺苷含量为指标,采用高效液相色谱法(HPLC),在单因子试验的基础上通过正交试验对其高产腺苷的液体培养基进行优化研究。结果表明,在培养温度25℃、摇床转速140rpm/min、摇瓶装液量100ml/250ml、接种量5%、培养时间6d的条件下,蝙蝠蛾拟青霉菌株RCEF0936的高产腺苷的最佳液体培养基配方为:葡萄糖2%,酵母浸出粉2%,硫酸锰0.05%,硫酸锌0.05%;试验中选择的4种因子对蝙蝠蛾拟青霉菌株RCEF0936菌丝体中腺苷含量的影响由大到小依次是硫酸锌酵母浸出粉硫酸锰葡萄糖,且均达到极显著水平(P0.01)。利用优化的培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌株RCEF0936菌丝体中腺苷含量可达到2.85mg/g,比优化前提高了390%,经统计学分析,两者差异极显著(P0.01)。     

提高蝉拟青霉多糖产量的液体发酵条件研究

以蝉拟青霉(Paecilomyses cicadae)0305-3菌株为材料,研究了提高蝉拟青霉多糖含量的液体发酵条件。结果表明,蝉拟青霉多糖含量的最佳液体发酵条件为:在液体培养基中,以7%的接种量将浓度为107个/mL的孢子悬液接入装液量为20%的液体培养基中,于pH 7、27℃1、50 r/min的转速下发酵7 d,0305-3菌株的多糖产量可达3.24 g/L。     

Pm0217F紫外诱变株间生物学特性差异研究

通过对Pm0217F菌株进行不同时间梯度的紫外诱变,得到5株不同的诱变菌株。通过对5个诱变株的菌落特征、生长速率、大孢子千分率、分生孢子不同聚集方式及虫草菌素含量等生物学特性比较,结果显示,诱变最适时间为60s,且大孢子比例高、拟青霉型产孢结构比例大的菌株生物学特性较优。     

玫烟色拟青霉对小菜蛾幼虫的侵染过程及接菌方法对其致病力的影响

采用扫描电镜观察玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)分生孢子在小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫体表的萌发和侵染过程及玫烟色拟青霉孢子粉、孢子悬浮液和孢子培养液对小菜蛾幼虫的致病力.结果表明:小菜蛾幼虫体表嵴状突起结构区附着的孢子较多, 刺状突起结构区附着的孢子较少;刺状突起结构区附着的孢子萌发较早, 多数孢子在接菌后16 h开始萌发, 而嵴状突起结构区附着的孢子多数在20 h开始萌发, 在平缓结构区孢子萌发最迟.在嵴状突起结构区和刺状突起结构区, 多数孢子萌发后产生芽管, 直接以芽管侵入幼虫体壁, 少数形成附着胞侵染寄主.此外玫烟色拟青霉3种不同接菌方法对小菜蛾幼虫的侵染速率和致病力大小明显不同, 其中孢子培养液比孢子悬浮液和孢子粉对小菜蛾幼虫的侵染速率快, 接菌44 h虫体表现出明显的感病症状, 致死中时为3.18 d;孢子悬浮液和孢子粉处理的小菜蛾幼虫, 60 h虫体出现感病症状, 致死中时分别为4.20 d和4.34 d;而且致病力大小也存在明显差异, 接孢子粉的处理明显高于孢子悬浮液和孢子培养液, 小菜蛾幼虫6 d的死亡率达76.2%, 而其他两种处理小菜蛾幼虫6 d的死亡率仅为59.8%和58.5%.本研究结果表明, 小菜蛾幼虫的体表结构影响玫烟色拟青霉孢子在寄主体表的附着、萌发和侵入, 玫烟色拟青霉孢子粉对小菜蛾幼虫的致病力最强, 明显高于孢子悬浮液和孢子培养液.     

淡紫拟青霉最佳液体培养基和发酵条件研究

采用正交实验对淡紫拟青霉IPC菌株的发酵培养基进行了研究,得到了适合其发酵培养的复合培养基配方,另外试验还证实适当增加通气量,发酵初始酸碱度控制在pH5－6、发酵温度在29℃更适合该菌株液体深层发酵。     

浓缩苹果汁中扩展青霉菌实时PCR快速检测条件的优化

为了研究苹果汁生产中棒曲霉素产生菌的快速检测,利用实时PCR方法快速检测扩展青霉的可能性,对扩增条件进行优化。在polygatacturonase基因引物设计和传统PCR扩增扩展青霉DNA的基础上,研究实时PCR扩增时退火温度、引物浓度以及底物质量浓度对扩增效果的影响,以获得最佳的参数。结果表明,用Lightercy-cler实时PCR扩增扩展青霉DNA的最佳退火温度为61℃,最佳引物浓度为0.20~0.40μmol/L,底物质量浓度对实时PCR扩增的影响较小。在以上参数下,可以获得良好的PCR扩增曲线、产物溶解曲线以及清晰的产物条带。研究获得的快速检测扩展青霉的实时PCR参数,可用于浓缩苹果汁工业化生产中扩展青霉的快速检测,也可作为其他微生物实时PCR检测时的方法学参考。     

三种丝孢类生防真菌孢子类疏水蛋白的含量与组分比较

比较研究了6株球孢白僵菌Beuaveria bassiana(Bb)、5株玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus(Pf)和3株金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae(Ma)孢子类疏水蛋白(HLP)的含量和组分.结果表明HLP含量因菌种和菌株不同而呈现显著差异,其中Bb2861孢子HLP含量最高达23.4μg·mg-1,而Ma297的最低仅5.0μg.mg-1.HLP组分在三种生防真菌间差异明显,球孢白僵菌(12.0、15.0和17.5 kDa)和玫烟色拟青霉(15.0和17.5 kDa)的种内差异不明显.但是,金龟子绿僵菌的HLP组分种内差异较大,Ma2125主要包括17.0和14.5 kDa条带,Ma0201主要包括19.0和13.5 kDa,而Ma297主要条带仅为13.5 kDa.在对Bb2860不同菌体结构的比较研究中,发现其气生分生孢子、气生菌丝和液生菌丝的HLP含量分别为26.3、18.2和16.5μg.mg-1,相互间差异显著,且均含有15.0和17.5 kDa的主要条带.害虫生防真菌孢子HLP含量及组分的初步探明为研究其生物学功能与潜在应用奠定了基础.     

一种虫草无性型营养缺陷型的诱变筛选

古尼虫草小孢变种(Cordyceps gunnii var.minor)的无性型古尼拟青霉小孢变种(Paecilomyces gunnii var.minor)G106菌株用两次紫外线处理法进行诱变,可使突变率增加4倍.对其中两株生长较好的突变株进行鉴定,结果为蛋氨酸缺陷型和亮氨酸缺陷型.稳定性检验结果表明这两株缺陷型均可作为原生质体融合时具有遗传标记的融合亲本.     

真菌吸附重金属离子的研究

利用黑曲霉和简青霉制备生物吸附剂,研究了它们对重金属Pb2 离子和Cd2 离子的吸附、解吸行为以及实验条件对吸附的影响,包括吸附剂用量、溶液pH值、吸附时间以及共存离子等因素.结果表明,黑曲霉和简青霉吸附Pb2 离子的最适pH值均为5,吸附Cd2 离子时均为3.二者对Pb2 离子的吸附均在4 h达到平衡,吸附量分别为29.07 mg·g-1和36.65 mg·g-1.Cd2 离子吸附也在约4 h达到最大吸附量,分别为26 mg·g-1和26.5mg·g-1.溶液中Zn2 离子和Cd2 离子的存在都会降低Pb2 离子的吸附量.2种吸附剂对Pb2 离子的吸附都符合Langmuir等温线模型,而对Cd2 离子的吸附都较为符合Freundlich等温线模型.1 mol/L HNO3对吸附有Pb2 离子的黑曲霉和简青霉进行解吸,解吸率分别可达77.4%和92.3%.