一株银杏内生真菌的鉴定及其活性代谢产物研究

药用植物内生真菌是一类重要的微生物资源,能代谢产生多种生物活性物质,本研究从浙江天目山自然保护区银杏Ginkgo biloba中分离获得1株活性菌株TMSF169。通过形态学和ITS rDNA序列分析,鉴定该菌株为团青霉Penicillium commune。发酵粗提物采用正相硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析,以紫外光或碘蒸汽显迹,配合活性追踪,从菌株TMSF169发酵液中分离获得1个具抗真菌及除草活性的化合物TMSF169A,通过质谱和核磁共振波谱等技术将其结构鉴定为圆弧菌醛酸（cyclopaldic acid）。活性测试表明,该化合物具有抗菌活性,对鸭跖草Commelina communis,反枝苋Amaranthus retroflexus,马唐Digitaria sanguinalis、空心莲子草Alternanthera philoxeroides、水稻Oryza sativa等植物均具有致病毒性,对芝麻Sesamum indicum和大豆Glycine max不敏感。结果显示菌株TMSF169具有较好的开发应用价值。     

一株产植酸酶青霉的分类鉴定及其植酸酶基因克隆 和在毕赤酵母中的表达

植酸酶是催化植酸盐水解成磷酸盐的一类酶的总称,添加到猪和家禽动物的饲料中可以提高植酸磷的利用率和促进对矿质元素的吸收利用。根据形态特征和ITS分子序列,作者对该实验室筛选得到的高产植酸酶菌株青霉RCEF4908进行了鉴定,确定该菌株在系统分类上属于草酸青霉Penicillium oxalicum Currie&Thom。利用特异性引物扩增出植酸酶成熟肽基因片段,蛋白质序列含有保守区域RHGXRXP和HD,属于组氨酸酸性磷酸酶家族。通过基因操作成功实现了植酸酶在Pichia pastoris GS115的表达。转化子P49在诱导培养144 h后酶活性可以达到约8 000U·mL-1。重组植酸酶在pH 2.5～7.0之间都有活性,在pH 5.5时酶活性最高;在90℃水浴处理10、20和30 min后酶活性仍分别保留53.8%、52.5%和45.2%,具有较高的耐热性,适宜于作为饲料添加剂,有进一步开发的价值。     

Streptomyces sp.N2所产农抗N2对桔青霉的拮抗活性及作用机制研究

【目的】Streptomyces sp. N2是本课题组分离筛选到的一株可产新型抗真菌活性物质(3-甲基-3,5-氨基-4-烯-吡喃-2-酮,分子式为C_6H_7O_2N,农抗N2)的新种,此活性物质对桔青霉具有良好的拮抗效果。从生长特征、细胞形态学等角度,为揭示农抗N2在桔青霉生长发育中的抑菌作用机理奠定基础。【方法】首先采用常量培养基稀释法测定了农抗N2对桔青霉的最低抑菌浓度、杯碟法测定了不同浓度农抗N2对桔青霉的抑菌活性菌丝和生长量法测定了不同浓度农抗N2对桔青霉生长曲线的影响,并通过扫描电镜及透射电镜探究了农抗N2对桔青霉超微结构的影响。【结果】Streptomyces sp. N2所产农抗N2对桔青霉有较强的抑制作用,而且其机理初步判定为破坏桔青霉菌丝的菌丝结构,推迟了桔青霉对数期的到来而抑制菌体的生长。菌体最低抑菌浓度(3 d)为5.77μg/mL,其对应的抑菌圈大小为(13.04±1.06)mm。药液处理后,桔青霉生长对数期推迟了2 d。由扫描电镜以及透射电镜结果可推测,农抗N2可干扰桔青霉细胞壁合成,破坏细胞膜结构,致使细胞发生质壁分离。【结论】农抗N2对桔青霉的菌丝生长具有很强的抑制作用,且具有浓度效应,其对桔青霉的形态和结构有很大的破坏作用,可以推测农抗N2能够影响桔青霉细胞壁相关蛋白的合成,使细胞壁的通透性增强,影响其细胞膜及内部细胞器。     

平菇母种分离中两种杀菌剂对青霉和绿霉的抑制试验

组织分离法分离母种的方法具有操作简便,菌种遗传稳定的特点,但在实验中经常受到霉菌污染。为优化分离结果,试验采用平板培养方式,对实验室常用两种杀菌剂及其不同浓度对平菇、绿霉和青霉三种菌丝生长的影响。结果表明:不同杀菌剂及其不同浓度对平菇、绿霉、青霉三种菌丝的抑制力也不同,全力威杂菌清在稀释倍数为1500倍时,能有效的抑制绿霉菌丝和青霉菌丝的生长,而对平菇菌丝的生长抑制作用较小;原克霉灵在稀释倍数为1000倍时,能有效抑制绿霉菌丝的生长,对平菇菌丝和青霉菌丝的抑制作用较小。     

采后浸泡或真空渗透钙、钡、镁对金矮生苹果青霉病的影响

金矮生苹果采收后立即用不同浓度CaCl2、BaCl2或MgCl2浸泡或真空渗透（33．32KPa）。经0℃下贮藏3个月后取出,用扩展青霉（PenicilliumexpansumLink）孢子悬浮液损伤接种果实,在18℃下培养9d。结果表明：不同浓度3种盐浸泡或真空渗透处理均未能降低损伤接种果实的发病率,可在一定程度上对腐烂产生抑制,真空渗透效果优于浸泡。8％CaCl2真空渗透为最有效处理,可降低34．76％的病斑面积,而8％BaCl2和8％MgCl2仅分别降低病斑面积25．11％和18．32％。在所有真空渗透处理中,只有4％和8％MgCl2处理可导致果实产生重度药害,8％CaCl2和2％、4％BaCl2处理权产生轻微药害。     

日本曲霉和顶青霉的毒性试验

对从云南省盘溪和剑川地区发霉稻草中分离出的日本曲霉(Aspergillus japonicusSaito),从盘溪发霉稻草和剑川马匹粪便中分离出的顶青霉(Penicillium corylophilum Dierckx)分别进行了荧光检测、脂肪分解2 项理化学特性鉴定。将2 株菌的固体和液体培养物,置室温产毒再经杀菌等方法处理后,进行了家兔皮肤涂抹试验,雏鸭和家兔的菌粮饲喂试验,小鼠皮下、腹腔注射试验,家兔耳缘静脉注射试验。日本曲霉能产生荧光,分解脂肪,使家兔皮肤增厚和引起红肿、结痂,能引起部分试验雏鸭、全部试验小鼠、部分试验家兔死亡;顶青霉能产生荧光,使家兔皮肤增厚和出现轻微红肿反应,能引起全部试验小鼠死亡。剖检试验动物均见程度不同的病理学改变。以上结果表明,日本曲霉和顶青霉对小动物均具有一定的毒力。     

施麦粒提高淡紫拟青霉对大豆孢囊线虫田间防效

 田间试验了施麦粒(Wg)对淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus菌株Ps-266(Ps)防治大豆孢囊线虫Heterodera glycines(SCN)的影响.Ps菌液(2×10⁷CFU/mL) 3000mL/hm²拌加入碎麦粒75kg播前2d,20d和40d处理土壤.播后35d和95d的SCN2龄幼虫、白雌虫和孢囊数量均显著低于Ps单用处理,而大豆产量显著提高(P≤0.05).3个Ps+Wg同剂量处理中,播前40d处理,对SCN幼虫孢囊的控制效果和大豆产量均显著高于播前2d和20d处理.由此揭示了淡紫拟青霉作为线虫生防剂的应用中,时间的提前量和辅料问题值得重视.     

海洋青霉(Penicillium sp.)FSO10441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究

对从黄海深海海底泥样中分离到的产纤维素酶活力较高的丝状真菌Penicillium sp．FS010441及其产酶条件和酶学性质进行了初步研究。该菌最适生长温度为15℃,最高生长温度为37℃,在4℃下可以生长,属于适冷菌。该菌所产纤维素酶的最适反应pH值为4．2,最适反应温度为50℃,在40～55℃之间有很强的酶活力。     

微生物挥发性有机化合物对指状青霉产孢的抑制及其机制

为有效防控柑橘绿霉病,分别测定丙酸乙酯、异丁酸乙酯、2-甲基丁酸甲酯、异丁酸和2-甲基-1-丁醇5种微生物挥发性有机化合物(volatile organic compound,VOC)单剂及其混剂(5种VOC体积比为1:1:1:1:1)对指状青霉Penicillium digitatum菌落生长和产孢的抑制作用、对指状青霉产孢关键调控基因表达量的影响和对分生孢子梗形态的影响及对柑橘绿霉病的室内防控效果。结果显示,丙酸乙酯、2-甲基-1-丁醇单剂和混剂对指状青霉菌丝生长有明显的抑制作用,EC₅₀分别为1.816、0.154和0.230μL/cm³;5种VOC单剂及五者混剂对指状青霉产孢均有不同程度的抑制作用,其中混剂对指状青霉产孢的抑制作用最明显,EC₅₀达到0.006μL/cm³;5种VOC单剂处理后,指状青霉帚状枝变短,侧枝发育不良;一定浓度丙酸乙酯、异丁酸乙酯、2-甲基丁酸甲酯或异丁酸处理后,指状青霉体内brlA和abaA基因过表达,然而2-甲基-1-丁醇和混剂处理后,其体内brlA、abaA和...     

大久保桃扩展青霉病斑外延组织中青霉菌及展青霉素的扩散范围检测

研究桃青霉病病斑外延组织中青霉菌及其次级代谢产物展青霉素的扩散规律,旨在明确病斑大小与被感染距离的关系。以大久保桃和扩展青霉为实验材料,用平板菌落计数法测定距病斑不等距离处的扩展青霉菌数量,并采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)测定其展青毒素含量。结果表明,腐烂斑处检测到的青霉菌菌落数量及展青霉素的含量最多;以腐烂斑处为中心,越远离腐烂斑处检测到的青霉菌菌落数量及展青霉素的含量越少;在病斑外延健康组织中,随着腐烂程度的增加,青霉菌菌落数量及展青霉素的含量呈先增加后减少的变化。建议当桃青霉病腐烂斑直径小于5 mm时剔除腐烂斑及其外延20 mm,剩余部分可用;当腐烂斑直径在10~30 mm时,剔除腐烂斑及其外延30 mm,剩余部分可用;当病斑直径超过30 mm时,应整个弃除。