巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析

[目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5’-Genome Walking和3’-RACE的方法,获得基因的5’-端DNA序列和3’-端cDNA序列,进而获得β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[结果]获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的特异cDNA片段、5’-端DNA和3’-端cDNA片段。经拼接后,扩增出全长cDNA。β-肌动蛋白基因cDNA全长1754bp,包括1137bp的开放读码框和617bp的3’-非翻译区序列。氨基酸序列相似性分析发现,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白氨基酸序列与杜氏盐藻、莱茵衣藻等的同源性较高。系统发育分析表明,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白与杜氏盐藻的相似性最高。[结论]首次获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并发现巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因非常保守。     

长江华溪蟹β-actin基因cDNA扩增及分子系统发育初步分析

利用RT-PCR技术,扩增了长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)β-actin基因片段,测序并结合GenBank数据库中蓝蟹(Callinectes sapidus)、中华绒螯蟹(E.sinensis)、黑背地蟹(Gecarcinus lateralis)、张口蟹(Neohelice granulata)、远海梭子蟹(Portunus pelagicus)、锯缘青蟹(Scylla serrata)6种蟹的同源序列进行比较。结果显示:在长为338 bp的β-actin同源序列中有115个变异位点,57个单碱基变化位点。7种蟹的种间核苷酸变异值从1.6%到25.3%,碱基替换比值从0.740到4.050,其中锯缘青蟹和远海梭子蟹亲缘关系很近,长江华溪蟹和地蟹、张口蟹亲缘关系较远,而中华绒螯蟹和远海梭子蟹关系较远。用NJ法和ML法构建了分子系统树,得到了相同的拓扑结构。系统发育分析表明长江华溪蟹单独形成一支,与其它海洋蟹的亲缘关系远,支持溪蟹单独划分总科。锯缘青蟹和远海梭子蟹先聚在一起,然后和黑背地蟹聚在一起,再和弓蟹科的张口蟹聚在一起,与传统形态学分类系统稍有不同。     

TNF-α对体外培养奶牛乳腺上皮细胞α-SMA mRNA及蛋白表达的影响

为研究重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达的影响,本研究采用组织块法体外培养和纯化出BMEC。以不同浓度(0、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL)重组人TNF-α作用BMEC,分别于不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)采用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测α-SMA mRNA相对表达量及其蛋白表达。结果显示,α-SMA mRNA相对表达量12 h TNF-α处理的各组及24 h,10 ng/mL处理组与对照组相比差异显著(p<0.05);随着TNF-α浓度的升高,α-SMA mRNA的相对表达量呈升高趋势;48 h和72 h处理组与对照组相比差异不显著。表明TNF-α对BMECα-SMA mRNA的表达有一定促进作用。然而,α-SMA的蛋白表达量却很低,只有24 h 10 ng/mL处理组检测到目的蛋白的表达。研究表明,外源性TNF-α能够促进BMECα-SMA mRNA和蛋白的表达。     

梭梭HaACT基因片段的克隆和3’UTR序列分析

【目的】以克隆HaACT基因为出发点,为进一步分析其表达特点奠定基础。【方法】根据NCBI上已发表的藜科其他植物肌动蛋白(Actin)序列的保守区设计一对简并性引物,以梭梭(Haloxylon ammodendron)同化枝为材料提取总RNA,采用RT-PCR法和3’RACE技术克隆了HaACT基因部分片段及3’UTR序列。【结果】得到HaACT基因片段1 107 bp,该序列编码257个氨基酸,3’UTR序列长度为416 bp。使用NCBI和DNAMAN软件对3’UTR序列进行了同源性分析。HaACT基因3’UTR序列与CaACT基因3’UTR序列的相似性高达93%,与BvACT基因3’UTR序列相似性为92%,与GhACT基因3’UTR序列相似性最低,为86%。【结论】HaACT基因与其他植物Actin基因可能具有相似的调控机制。     

肉雏鸡肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达产物的RT—PCR检测

细胞谷胱甘肽过氧化物酶（cGPX)是动物体内一种重要的抗氧化酶。建立了利用RT－PCR并以β－肌动蛋白（β-Actin)为内参照定量cGPX mRNA表达的方法。提取肉鸡肝总RNA，经反转录和PCR扩增，PCR产物的电泳条带于VDS摄像系统扫描灰度。寻求PCR线性扩增范围，确定PT－PCR的的最佳循环次数和模板量。通过计算cGPX PCR产物与β-肌动蛋白PCR产物的灰度之比，即可得出cGPX mRNA的相对含量。     

褐飞虱Nilaparvata lugens（Stal）肌动蛋白基因3′－RACE及基因表达的RT－PCR检测

通过锚定的3'-RACE筛选实验,确定锚定效率最好的下游引物,用于褐飞虱各发育期肌动蛋白基因表达的RT-PCR检测.结果表明3个锚定引物中,0422-7(5'＞TCA CAC AGG AAA CAG CTA TGA CTTTTTTTTTTTTTT A＜3')的锚定效率最好,可以扩增出5条褐飞虱的肌动蛋白基因3'末端片段,依其大小命名为BPH-A、BPH-B、BPH-C、BPH-D、BPH-E.RT-PCR检测表明BPH-A从3龄开始到成虫期都有常量表达;BPH-B、BPH-C、BPH-E从2龄开始到成虫期都有表达;BPH-D在整个幼虫期都有表达,而在成虫期则检测不到.     

豌豆肌动蛋白基因在大肠杆菌中的表达

高等植物细胞内含有肌动蛋白，但含量较低，难于提取及进行进一步研究，我们用PCR的方法扩增肌动蛋白cDNA，并克隆到表达质粒pTrpHis，然后转化大肠杆菌DH5α，在IPTG诱导下，肌动蛋白表达在包涵体中，在没有IPTG诱导时，肌动蛋白表达在胞液中。     

植物细胞微丝骨架对真菌侵染的反应

植物细胞骨架对真菌侵染的反应是近10年来才兴起的一个新研究领域，简要介绍了该领域研究的进展情况和发展趋势，包括：植物微丝骨架的结构和功能的简介：真菌侵染时植物细胞骨架（主要是做丝骨架）的变化情况，并对微丝骨架的这种反应在植物抗病性中所起的作用进行了探讨。     

三个桑树肌动蛋白基因的克隆与组织表达分析

肌动蛋白基因在植物各种生理活动中具有极其重要的作用,通过同源克隆与反向PCR的方法,克隆了3个肌动蛋白基因的核心片段,其中一个为已报道的MaACT1,另两个分别被命名为MaACT2和MaACT3,进而PCR扩增获得MaACT1和MaACT2肌动蛋白全长CDS,其中MaACT2基因全长1 704 bp,由4个外显子和3个内含子组成,CDS为1 134 bp,编码377个氨基酸残基。采用RT-PCR的方法分析了3个基因在叶、茎、果、根等组织的表达情况以及在茎、叶和托叶的生长过程中的表达变化。MaACT1在茎中表达量较弱但有随着茎的生长逐渐增强的趋势,在幼叶中有较高的表达,MaACT2与MaACT3在根、茎、叶等组织中都有较高表达,MaACT3在叶、托叶和茎的各个发育时期表达都很稳定,可以作为桑树基因表达研究的内参基因。     

毛冬青和复方丹参注射液对猪血小板细胞骨架蛋白的影响

本文用Triton沉淀法研究了毛冬青和复方丹参注射液对猪血小板细胞骨架蛋白的影响。结果表明:(1)毛冬青注射液对凝血酶诱导的肌动蛋白聚合和肌球蛋白与肌动蛋白微丝的结合都有强烈的抑制作用,IC_(50)分别为200μg/ml,120μg/ml;(2)复方丹参注射液(100mg/ml,含丹参生药量)可抑制凝血酶诱导的肌动蛋白聚合,抑制率为51.2％;并可完全消除凝血酶刺激的肌球蛋白与微丝的结合。本文从新的角度阐明了毛冬青和复方丹参注射液抗血小板作用的机制。