带毒传代工艺在狂犬病细胞苗生产中的应用

狂犬病细胞苗的传统生产方法是取长成“ ”的BHK21细胞单层，弃去生长液(血清含量100mL／K)，按1．5万mL细胞培养瓶每瓶40mL的量接毒旋转，使毒液浸润整个细胞面，37℃旋转吸附40～60min，加入2000mL维持液(含血清30mL／L)，37℃旋转培养48h后，调pH至7．2～7．4，继续培养至96～120h，冻毒，收获细胞培养物。传统方法的生产成本高，劳动强度大，种毒使用量大。2004年笔者采用带毒传代工艺生产狂犬病细胞苗，效果较为满意。     

生物制品中的支原体污染

<正>支原体(Mycoplasma)是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2μm)并独立生活的微生物,是生物制品细胞培养中较常见的污染物。目前,细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染已成为一个世界性问题。据报道,目前世界上有30%～50%的细胞系(株)已受支原体污染。但是在生物制品制作过程中即使有大量的支原体污染,也不会像细菌、真菌那样在普通培养基上明显地观察到,必须有适宜其生长的培养基进行培养时才能发现。污染的支原体在组织培养中繁殖有     

新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞体外培养体系的建立

利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;通过接触抑制和解除抑制研究该类细胞的增殖潜力,免疫荧光进行鉴定;并通过脂质体介导对分离到的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞分别进行EGFP-N1和DsRed-N1基因转染。结果成功分离到新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,体外可以大量传代和冷冻,目前已经传至50代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性;转染48h后荧光显微镜下可以观察到绿色荧光和红色荧光,表明瞬时转染新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞可以获得成功,其中转染DsRed-N1基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞已经传至60代以上。结果表明,本试验成功建立了新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞的体外培养体系,在体外能稳定培养和传代,并可以成功获得转基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞。     

贵德黑裘皮羊耳成纤维细胞系的建立和生物学特性的研究

以贵德黑裘皮羊耳缘组织为材料，采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻技术成功构建了成纤维细胞系，并对培养细胞进行了形态学、生长动力学观察、细胞活力测定、核型分析和微生物检测。结果表明：细胞群体倍增时间（PDT）约为36h，冻存前细胞活力为96．2％，以DMEM／F-12＋20％FBS中添加10％DMSO冻存成纤维细胞，解冻后细胞活力为93．6％，24h后的贴壁率为85％。在传代10次之前，细胞染色体中二倍体（2n=54）占主体，约为82％～90％，细菌、真菌、病毒、支原体检测为阴性。该细胞系的建立，使贵德黑裘皮羊这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来，也为体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。     

仙居鸡染色体G带和Ag-NORs的研究

运用改进的鸡外周血淋巴细胞培养——空气干燥法，分析了仙居鸡染色体G带和Ag—NORs。G带研究结果表明：前10对大型染色体可分为30个区，144条带，同时对G带带型特征进行了具体描述，并绘制了G带模式图。Ag—NORs处理发现：仙居鸡的Ag—NORs常分布于1p、3p、4p、Zp、2q上，均数为3．26，众数为3。不同个体间以及同一个体的不同细胞间。Ag—NORs数目存在多态性；此外研究还发现Ag—NORs联合现象。     

卵巢表皮上皮的生物学特性及其细胞培养

将近90%以上的恶性卵巢癌发生于覆盖在卵巢表面的单层上皮细胞——卵巢表皮上皮(ovarian surface epithelium,OSE),将其称之为卵巢表皮癌。由于先前研究人员未找到合适的动物模型,卵巢表皮上皮细胞的培养方法在近期才得以确立。作者旨在于总结卵巢表皮上皮的生物学特性及其细胞培养方法和不同物种间卵巢表皮上皮特性的变化。     

仔猪小肠平滑肌细胞体外培养方法的建立

为了建立简便、高效的仔猪小肠平滑肌细胞体外培养方法,为相关研究提供试验材料,采用组织贴块法和酶消化法进行原代培养,胰酶消化传代,并应用倒置显微镜和SABC试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果采用组织块贴块法培养的仔猪肠平滑肌细胞有90%的组织块接种存活,初次传代后的平滑肌细胞纯度达95%以上。免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达。而酶消化法培养的仔猪肠平滑肌细胞,生长缓慢甚至死亡。表明组织块贴块法是为简便、可靠,短期内可获大量高纯度的仔猪小肠平滑肌细胞的原代培养方法。