小麦白粉菌环介导等温扩增检测技术体系的建立与应用

为建立简便、快速和灵敏的小麦白粉菌Blumeria graminis f.sp.tritici(Bgt)分子检测技术体系，基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术，以BGT96224V316＿LOCUS1725基因(GenBank:VCU40465.1)为靶标序列，设计并筛选特异性引物，建立小麦白粉菌的LAMP检测方法，并对其特异性、灵敏度和应用效果进行测定。结果表明，基于筛选出的1套特异性引物建立的LAMP方法能够从8种白粉菌属菌株和1种腐生菌中特异性地检测到小麦白粉菌；对小麦白粉菌DNA样品的检测灵敏度可达到300 fg/μL;对发病叶片的检测显示该LAMP方法能从人工接种的小麦叶片中准确检测出小麦白粉菌，检出时间为接种4 h及以上。综上，本研究建立了一种小麦白粉菌的LAMP检测方法，具有简便快捷、灵敏度高等特点，丰富了小麦白粉菌的检测体系。     

4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价

牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物，PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法，以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物，通过温度梯度PCR法确定最适退火温度；采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限，同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验；最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果。4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌，其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌。IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高，可达10^-10 ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达10⁶ CFU/mL以上，而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达10^...     

小型玉米脱粒机机架模态分析与优化设计

为避免小型玉米脱粒机机架与外部激励频率发生共振，保证工作稳定性，对小型玉米脱粒机机架进行多目标优化设计。使用ANSYS Workbench软件构建机架有限元模型及模拟分析前6阶模态和振型，得出优化前机架前6阶固有频率为48.26~156.76 Hz，其中1阶固有频率接近电动机产生的激励频率。通过灵敏度分析法探索影响机架1阶固有频率和质量的因素及次序，确定优化设计因素，并建立因素与优化目标数学模型，采用中心复合设计（CCD）和最佳填充空间设计(OSF)试验方法进行仿真。仿真结果表明，影响频率的结构参数从大到小依次为挡料板厚度、方钢及侧板厚度、下料板厚度、导风板厚度、下料板与导风板夹角；两种试验法对质量的优化结果接近，但在提高1阶固有频率方面CCD要优于OSF，CCD优化方案对机架的1阶固有频率提高了16.8%，质量下降了17.1%；最后通过振动分析仪测定优化前后机架固有频率，测得改进后机架1阶固有频率实际值为57.48 Hz，达到了避免共振的目的，整机作业过程稳定、安全可靠，同时为相关机具的优化改进提供了理论参考。     

液体培养法与qPCR法对检测猪鼻支原体灵敏度比较

为了比较《中国药典》已收录但相当耗时的液体培养法和未收录但相对快速的荧光定量PCR(qPCR)法对支原体检测的灵敏度，试验分别在猪鼻支原体生长的对数期（48 h）、稳定期（96 h）和衰亡期（144 h）取样，将样品10倍系列稀释后，使用液体培养法和qPCR法对各个稀释度进行检测（两种方法的样品加入体积分别为0.5 mL和5μL），以比较二者的灵敏度。结果显示：在存活支原体占比高的对数期和稳定期，液体培养法比qPCR法的检测灵敏度高约100倍；而在死亡支原体占比大幅增加的衰亡期，结果则相反，qPCR法反而比液体培养法的检测灵敏度高约1 000倍。当把对数期样品高速离心浓缩约100倍后再用qPCR法检测，其检测灵敏度比浓缩之前提高了约100倍。上述结果表明：影响液体培养法和qPCR法相对灵敏度的主要因素是各自体系中不同的样品加入体积和样品中存活支原体的比例，而由于前一因素导致的两种方法灵敏度的差异，可以通过高速离心浓缩的方法缩小，使两种方法的相对灵敏度基本相同。     

高效液相色谱分析土壤氨基糖的质量控制方法

利用邻苯二甲醛(OPA)柱前在线衍生–高效液相色谱法测定了土壤中4种氨基糖，即胞壁酸(Mur N)、甘露糖(Man N)、氨基半乳糖(Gal N)和氨基葡萄糖(GluN)的含量，并从样品出峰、理论塔板数、信噪比、检出限、定量限、样品的重复性、标准样品的线性和加标回收率方面评估了检测过程中仪器和方法的灵敏度、精密度和准确度。结果表明：检测过程中，4种氨基糖的出峰先后顺序为胞壁酸、甘露糖、氨基半乳糖和氨基葡萄糖；4种氨基糖的色谱峰峰形好，相邻两峰的分离度>1.5，相邻两峰能够完全分离；理论塔板数>2 000，色谱柱的柱效高；胞壁酸、甘露糖、氨基半乳糖和氨基葡萄糖的仪器检出限分别为0.030、0.300、0.150和0.150μmol/L，仪器定量限分别为0.100、1.000、0.500和0.500μmol/L，方法检出限分别为0.010、1.500、0.100和0.100μmol/L，方法定量限分别为0.030、5.000、0.300和0.300μmol/L；除0～10 cm以下土层中的甘露糖外，其他土壤样品中氨基糖的信噪比均>10，仪器和方法的灵敏度高；氨基糖样品含量...     

不同分子生物学方法在H5亚型禽流感病毒检测中的应用比较

H5亚型高致病性禽流感(H5-HPAI)是严重危害家禽养殖业和公共卫生健康的一类动物疫病,也是我国高度重视、严格防控的人兽共患病。目前常用检测H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)的分子生物学技术包括反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、反转录重组酶辅助扩增(RT-RAA)、RTRAA结合侧流层析试纸条(RT-RAA-LFD)、RT-RAA-簇状规则间隔短回文重复序列及其相关蛋白结合侧流层析试纸条(RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD)等。为比较不同检测方法对H5-AIV检测的灵敏度差异,将制备的cRNA标准品进行倍比稀释,分别用RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPR Cas13aLFD进行检测。结果显示:RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD与RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD方法的检测灵敏度分别为10²、10^-1、10⁰、10⁰、10^-1     

代谢灵敏度分析在网络故障诊断与自愈中的应用

以交通运输网络为例对网络化系统进行了建模分析,利用人工代谢系统的代谢灵敏度折线图对网络支路流量变化进行了分析,得到了故障产生的瓶颈位置.通过调节代谢算子对网络拥塞程度进行了控制,使网络流量趋于平衡,最终实现网络自愈.实例分析表明:人工代谢系统能实现故障的准确定位,代谢反馈调节机制在网络自愈中起到了关键作用.