黑龙江地区断奶仔猪腹泻大肠杆菌种系类群、血清型和毒力基因分析

揭示黑龙江地区集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)直肠棉拭子分离到的123株大肠埃希菌所属种系分类群、O血清型及其与毒力基因的特征.采用常规凝集试验进行测定,种系分类群标记的ch uA、yjaA基因和TSPE4.C2DNA片段及肠毒素基因STa、STb、LT、SL T-2e采用PCR方法检测.在123株分离菌株中,除21株未定型、10株自凝外,测定出92株分离的血清型,覆盖18个血清型,其中以O8、O 9、O 149 3种血清型为主,共57株,占定型菌株的61.96％.环境共生的种系进化A群113株占91.87％,肠外强致病D种系进化群2株占1.63％.肠毒素检出菌株74,占分离株的60.16％,其中以STa、STb为主,共占肠毒素检出株的94.59％.结果显示黑龙江省PWD病原性大肠埃希菌优势血清型为O 8、O9、O149,大肠埃希菌肠毒素主要毒力因子为STa、STb,种系进化群为A.     

基于荧光显色的环介导等温扩增技术(LAMP)检测禽呼肠孤病毒

建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力.     

马立克氏病毒1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性的影响

构建了针对1.8-kb mRNA基因簇潜在阅读框的RNA干扰质粒pP(1.8-kb-RNAi).将该质粒与包含其上游双向启动子的质粒pP(pp38)-CAT和pP(1.8-kb)-CAT共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)和MDV rMd5感染的CEF(rMd5-CEF),48 h后,通过测定转染细胞裂解液中氟霉素乙酰转移酶(CAT)的活性确定1.8-kb mRNA被干扰后对双向启动子活性的影响.结果显示,利用pP(1.8-kb-RNAi)质粒干扰1.8-kb mRNA,可以使其上游双向启动子两个方向的活性均显著下降(P<0.01),其中1.8-kb mRNA方向下跌29.5%,pp38方向下跌25.0%.本研究结果证明了1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性有增强作用.     

额尔齐斯河银鲫对饲料蛋白质需要量的研究

为了解额尔齐斯河银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)对饲料蛋白质的适宜需要量,本试验配制了6种不同蛋白质水平(27％、31％、35％、39％、43％、47％)的实用配合饲料,饲养初始体质量(52.95±3.22)g额河银鲫8周,分析了饲料蛋白质水平对其生长性能、饲料利用、体成分及血清生...     

酶联免疫分析法及其在兽药残留检测中的应用

介绍酶联免疫分析法(ELISA)的原理及其在兽药残留检测中应用的技术要点,并对酶联免疫分析法在兽药残留检测中的应用前景作了展望。     

基于文献计量的抗生素耐药基因(ARGs)传播研究现状及热点分析

为了了解抗生素耐药基因传播研究的整体状况和前沿动态,以WebofScience核心合集数据库集为基础,对20082017年间全球范围内有关该研究领域的文献报道开展计量学分析,从总体情况、研究力量、研究热点等方面进行系统评价。结果表明,10年间有关该领域的研究报道增加显著,自2008年的341篇增加到2017年的1011篇,增加196%。国内学者发文量自2008年的15篇增加到2017年的210篇,文献增长趋势显著高于国外。通过对作者分析表明,主要研究力量持续增加,主要高产作者(第一作者和通讯作者)后5年比前5年发文量增加。通过对论文关键词计量分析表明,四环素是目前关于抗生素耐药基因传播研究热点抗生素,废水则是热点研究基质。研究较多的耐药菌包括鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、沙门菌、铜绿假单胞菌等,其耐药机制主要涉及β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶以及碳青霉烯酶类耐药基因。具体研究内容主要有多重耐药、致病性、流行病学、整合子、共转移、质粒、生物膜、演化、基因水平转移、可移动基因元件等。综合文献计量分析结果,抗生素耐药基因传播仍然是抗生素耐药研究领域的研究热点,在未来的研究发展趋势方面,质粒在抗生素耐药基因传播中所扮演的角色、抗生素耐药性的起源与演化等方向将具有特定的研究价值和发展空间。     

大肠杆菌新型菌毛(F1987)的基因定位

对动物产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)的一种新型菌毛 (F1987)进行了相应基因的定位研究 ,通过对表达该新型菌毛 (F1987)相应 ETEC菌株的培养、质粒提取、对大肠杆菌受体菌株 DH5α的转化及阳性转化子筛选与相应菌毛表达的检定等 ,初步表明该新型菌毛 (F1987)的基因定位于质粒上     

猪场环境大肠杆菌qnrA和aac(6’)-Ib基因检测

为了解质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr在猪场环境大肠杆菌的流行分布及变异情况,从贵州省规模养猪场空气、污水、粪便和土壤样本中分离、鉴定大肠杆菌57株,PCR检测qnrA和aac(6’)-Ib基因,测序分析aac(6’)-Ib-cr基因变异体,并用药敏纸片琼脂扩散法测其对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性。结果表明:57株大肠杆菌均未携带qnrA基因;8株检出aac(6’)-Ib基因,分别来自污水、粪便和土壤样本,且介导对喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素的广泛耐药性。E.coli3和E.coli4在第75(A)、76(G)或488位(A)碱基缺失;E.coli5在第222位(A→T)变异,E.coli1、E.coli2、E.coli3、E.coli4、E.coli5、E.coli7和E.coli8在223位(T→C)和454位(G→T)变异;E.coli3、E.coli4在第492位有A、C碱基增添。说明贵州省规模养猪场肠杆菌科细菌qnrA基因携带率较低,但存在aac(6’)-Ib-cr基因。     

玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况调查

为评估近年来玉林市猪伪狂犬病流行情况,于2010年—2012年分别对不同来源于散养户、规模场、种畜场的1 441份血清样品进行gE-ELISA和PCR检测,对与本实验免疫效果相关的免疫次数、疫病净化、疫苗使用等因素进行调查分析。发现玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况:免疫三次以上的猪群,免疫效果明显,注射猪伪狂犬TK/gE—双基因缺失疫苗的猪群阳性率比注射其它品种的疫苗要低。     

沂南县某蛋鸡场新城疫、禽流感H5亚型（Re-5株）抗体水平的监测

新城疫、禽流感作为危害养禽业的主要传染病,通过其抗体水平监测,分析免疫状态,对鸡群合理饲养,确保养鸡业健康发展。本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测。试验结果表明,新城疫平均HI抗体效价为9.4 log 2,禽流感H5亚型(Re-5株)平均HI效价为7.64 log 2,说明整场免疫合格,但鸡群需要补种禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。