银杏原生质体制备及其融合研究

以银杏品种湖南梅核成熟胚进行组织培养得到的无菌苗和愈伤组织为材料,用不同酶液处理进行原生质体制备,并用PEG法进行原生质体融合实验。结果显示,以2.0%纤维素酶+1.0%果胶酶+5.0mmol/LMES+6mmol/LCacl2+0.6mol/L甘露醇( 号酶液)酶解银杏组织、方法1提取原生质体效果最好,其最高原生质体产率为9.4×107个/g;以17%蔗糖溶液处理得到原生质体质量最好。用40%PEG6000+0.3mol/L钙离子+pH9.5液体处理原生质混合液,银杏原生质体融合率最高,为67%。     

大豆原生质体培养研究进展

大豆原生质体培养研究进展肖文言,王连铮(中国农业科学院100081)大豆原生质体培养诱导再生植株,一直为国内外学者所关注。栽培大豆(GｌycinemaxL,)原生质体培养,自Ｓchenk和hiｌｄebranｄt(1969)由大豆子叶愈伤组织细胞游离原……     

苜蓿愈伤组织原生质体游离与培养

对阿尔冈金苜蓿(Medicago sativa L. cv. Algonguin)原生质体游离和培养的最佳条件进行研究,建立其细胞融合原生质体杂交体系。以下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了愈伤组织继代培养时间、酶液组合、酶解时间及酶液渗透压对原生质体游离的影响,并探讨了愈伤组织原生质体在KM8P培养基上的分裂情况。结果表明:继代12d的愈伤组织游离性最好,最佳酶液组合为2%纤维素酶+0.5%果胶+1%半纤维素酶、最佳酶解时间为12h、最佳酶液渗透压为0.55mol/L;最适宜培养苜蓿愈伤组织原生质体的培养基为KM8P+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA。     

小麦蛋白激酶TaNPK启动子的克隆及活性分析

 【目的】克隆小麦蛋白激酶基因TaNPK启动子,并分析5′非编码区对盐胁迫的响应,探索TaNPK的调控机制,为解析小麦抗盐机制提供理论依据。【方法】利用染色体步移技术从小麦中分离TaNPK读码框上游序列,构建启动子缺失突变体,在PEG4 000介导下将重组质粒转入拟南芥叶片原生质体进行瞬时表达分析,以gus为报告基因研究不同调控序列的活性及盐诱导性分析。【结果】获得了TaNPK读码框上游2 004 bp的启动子序列,PEG介导的拟南芥原生质体瞬时表达分析表明,5′端缺失片段都在不同程度上驱动了GUS的表达;经过NaCl处理后的原生质体,GUS的表达量比不经处理的对照组明显提高,这与NaCl处理下TaNPK的实时荧光定量分析结果一致。【结论】经克隆获得了受盐胁迫诱导的小麦TaNPK启动子,启动子缺失区段在不同程度上驱动了gus的表达,-1 083—-1 296 bp区段可能含有响应盐胁迫的负调控元件。     

灰树花多糖高产菌株诱变选育研究

采用原生质体紫外诱变法选育灰树花多糖高产新菌株,经过大量的诱变筛选试验,获得一株灰树花新菌株,其液体摇甁发酵试验菌丝体生物量和胞内多糖产量分别达到1.15 g/100 m L和0.78 g/L,在同样条件下比出发菌株提高了40.2%和37.5%,且遗传性状稳定,有望作为优良菌种应用于液体深层发酵法制备灰树花多糖的工业化生产中。     

香菇和凤尾菇原生质体融合初探

选用经高温灭活的香菇原养型双核原生质体作供体亲本 ,以带有脯氨酸( Prol)营养缺陷型标记的凤尾菇单核原生质体为受体亲本 ,对其原生质体融合情况进行研究。结果发现 ,两亲本原生质体的融合再生率为 0 .1 0 6%,部分融合子菌丝细胞多核 ,无锁状联合。对该融合子再进行原生质体分离、再生 ,得到了具有新的生理特性的菌株材料。表明这种单双核原生质体融合是实现食用菌属间远缘杂交育种的有益探索     

紫菜种内原生质体的融合和融合体再生

利用酶解法分离出野生型叶状体和红色突变体的坛紫菜原生质体以及条斑紫菜野生型叶状体的原生质体，再用聚乙二醇（PEG）法进行种内原生质体融合，当加入原生质体液内的PEG被稀释除去百，原生质体发生融合并形成许多杂合体，种内原生质体融合率坛紫菜为9.7%-12.4%，条斑紫菜为10%-11.5%。PEG分子量在1540-6000之间，随着分子量的提高，原生质体融合率增高，原生质体融合体被挑出来进行单个培养，经过30天培养坛紫菜的一个杂合体（含一个红色原生质体和一个进驻生型原生质体）再生成一个呈红色和野生色的相嵌叶状体，鸸 个含两个红色原生质体的融合体再生成一个在基部和头部均长假根的叶状体，但来自这个再生体的原生质体只长成具有一个假根的叶状体，从原生质体融保体的再生体以及它们无性繁殖体的结果来看，坛紫菜的种内原生质体融合体可能只发生了细胞质融合，而真正的核融合并没有发生，培养15-20天，条斑紫菜的原生质体融合体先再生成细胞团，然后由细胞团释放出许胞子并萌发成正常野生型叶状体。     

茄子的生物技术

茄子(Solanum melongena L．)是栽培在世界不同热带和温带地区的一种重要的蔬菜作物。茄子的栽培种以及野生种中存在广泛的遗传多样性；茄子栽培品种对很多种昆虫和病原体以及各种非生物胁迫环境都是敏感的。相反，大多数野生种对已知的几乎全部昆虫和茄子的病原体都有抗性，因而是茄子作物改良时希望性状的来源。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。     

原生质体融合构建新型酿酒酵母

在阐述原生质体融合技术原理的基础上,论述了原生质体融合技术的研究进展及其在优良酿酒酵母菌选育上的重要应用,并通过分析其在高发酵力、糖化性能、耐高温性能、嗜杀活性、高絮凝性、产香性能等优良性状整合上的研究结果和存在问题,认为原生质体融合技术在酿酒酵母的良种选育、代谢生理、遗传研究方面具有广泛的应用前景和重要的应用价值,同时提出了应用该项技术构建新型果酒酵母的构想。