应用均匀设计研究电场刺激及培养因素对甘蓝叶原生质体分裂频率的影响

应用均匀设计法探讨了电场刺激及培养因素对甘蓝叶原生质体分裂频率的影响。结果表明 ,电场方向和强度强烈地影响细胞分裂频率。培养成分对细胞分裂频率均有不同程度的影响。均匀设计能筛选最优的植物原生质体培养条件或培养基。结合“回归 -通径”分析 ,有效地综合评判和研究了各培养成分对原生质体分裂频率的作用     

苎麻脱胶菌株的原生质体紫外线诱变育种及应用

为实现苎麻的生物脱胶,本研究对苎麻脱胶菌株HY11原生质体进行紫外诱变筛选,以诱变菌株的果胶酶活性为筛选指标,筛选出脱胶菌株HY11-73,并对该菌株进行形态观察及脱胶试验.结果表明,菌株HY11-73果胶酶产量高于出发菌HY11 123.3%,生长速度提高了42.86%;诱变菌HY11-73对苎麻具有较好的脱胶效果,3 d可以完成脱胶,苎麻的失重率为34.04%;脱胶后纤维的化学成分分析结果表明,诱变菌HY11-73除水溶物含量外其余指标均优于出发菌HY11.     

枯草芽孢杆菌Snb2原生质体制备和再生研究

研究了青霉素、甘氨酸、溶菌酶浓度、酶解温度、菌龄、再生培养基对生防芽孢杆菌Snb2原生质体的形成与再生的影响。培养液中青霉素和甘氨酸的终含量分别为0.3%和1.0%时,菌株Snb2的生长量最佳;菌株原生质体形成的最佳条件是,溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1,酶解温度为35℃,生产原生质体的最佳菌龄为对数生长中期;在最佳再生培养基HCNB培养基上,原生质体再生率为66.0%。     

姬松茸原生质体再生条件的优化

为提高姬松茸原生质体的再生率,对姬松茸原生质体再生的条件进行了优化.结果表明,将培养5 d的姬松茸种子液点种在覆以玻璃纸的菌丝生长培养基上,26℃培养5 d,用2.0%的裂解酶以pH6.0,0.8 mol/LNaCl为稳定液,在30℃下酶解6 h,可制备得到菌落数为1.8x107cfu/mL的原生质体液.将原生质体悬液经G2过滤器过滤除菌后在GM上再生,原生质体再生率町达8.53%,残片率2.43%.     

金钗石斛类原球茎原生质体的分离

以具有较多生长点的金钗石斛PLBs为材料,研究通过酶解法获得原生质体的适宜条件。结果表明,酶液配比为φ=1%纤维素酶（Cellulase Onozuka R10）＋φ=0.4%果胶酶（Macerozyme Onozuka R10）＋0.65mol·L-1甘露醇,pH5.7;黑暗条件下,（25±2）℃,60r.min-1振荡酶解6h,800r.min-1离心分离4min,获得的原生质体质量较好。经计数和伊凡蓝染色法检测,用此法获得的金钗石斛PLBs原生质体鲜质量产量为（8.25±0.17）×105个.g-1,活性为（90.24±1.84）。（蓝光（470～75nm）激发活力检测发现较小的分生细胞具有较强的活力。     

桑悬浮细胞原生质体培养的研究

采用继代培养三个月后的桑子叶悬浮细胞为材料,进行了原生质体的分离和培养。桑悬浮细胞在纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶的混合溶液中,酶解获得产量高、活力强的原生质体。原生质体在K8p(附加6—BA、NAA、2,4—D、LH)液体培养基中,再生细胞经多次分裂,得到肉眼可见的小愈伤组织。再通过增殖继代培养,获得浅黄色、具有明显颗粒结构的愈伤组织,转至各种激素含量的MSB固体培养基中,尚未获得绿苗分化。     

电穿孔法诱导GUS基因在坛紫菜原生质体中的瞬间表达

基因工程研究已在高等植物中广泛开展，尤其对重要经济作物如水稻、玉米、大豆等的品种改良不断取得可喜成果。在藻类中基因工程起步较晚。Rochaix和Van Dillewjin于1982年第一次报道了对单细胞衣藻以质粒为载体进行的基因转移[Rochaix等，1982]；Veeck等于1987年以蓝藻为材料进行了基因转移的研究，Boynton等于1988年以衣藻为材料成功地得到了转基因藻株[王素娟．1994]。     

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。     

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅰ.原生质体的制备、再生和融合

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。     

马铃薯叶片原生质体的游离纯化

文章以马铃薯四倍体普通栽培品种Desiree、东农303和二倍体野生种S.pinnatisectum品系脱毒试管苗叶片为材料,研究了不同的酶组合、酶液浓度、酶解时间以及温度等因子对原生质体游离纯化的影响。结果表明,低温预处理有助于提高原生质体的产量;最佳酶液组合为纤维素酶1.0%+离析酶0.5%;对于四倍体栽培种较短的酶解时间(13 h)较为适宜,而野生种需要较长的酶解时间(18 h)。