三聚氰胺半抗原及完全抗原的合成与鉴定

本研究合成了三聚氰胺半抗原及完全抗原并鉴定合成是否成功,为制备三聚氰胺抗体奠定基础。将2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪和3-巯基丙酸的反应合成半抗原3-(4,6-二氨基-1,3,5-三嗪-2-基硫代)丙酸,采用质谱鉴定和红外光谱鉴定;通过活性酯法将半抗原分别与牛血清白蛋白、卵清蛋白进行偶联制备完全抗原,采用紫外光谱法初步鉴定,后经动物免疫进一步验证。结果表明半抗原与完全抗原合成成功,为后续的抗体制备奠定了基础。     

抗球虫药莫能菌素钠盐半抗原的改造

生产中制备的莫能菌素以钠盐形式存在,没有直接与选用的载体蛋白偶联的基团,因此不能直接用于免疫原的合成,必须加以改造形成含羧基的物质才能偶联,合成免疫原以便生产抗体。本实验采用三种方法将莫能菌素钠盐改造成含羧基的莫能菌素酸及莫能菌素-琥珀酸酐衍生物,为建立免疫检测方法提供基础。     

2005年农药专利信息

拟除虫菊酯类水稻螟虫灭杀用混配杀虫剂；制备用于硫代磷酸酯杀虫剂免疫分析的半抗原的方法；灭螨害虫杀虫剂；含氰菌胺杀菌剂、杀虫剂组合物；一种杀虫剂；一种杀虫剂组合物；[编者按]     

丙烯酰胺单克隆抗体的制备

丙烯酰胺分子量小,结构简单,因此制备其特异性抗体比较困难.试验将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应合成丙烯酰胺半抗原,半抗原偶联KLH载体蛋白合成抗原,通过免疫制备单克隆抗体,并对其进行了抗血清的效价、半抑制率、交叉反应测定.结果表明:免疫原为AM-KLH,包被原为AM-OVA测定的抗血清效价最高为1:32000倍,其半抑制率(IC50)为120.323 ng·mL-1,该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均<1.48.探索了丙烯酰胺单克隆抗体的制备方法,为丙烯酰胺快速检测方法的建立提供了新的思路.     

川楝素半抗原设计及其抗体制备

【目的】获得抗川楝素的高灵敏度,高特异性多克隆抗体,建立川楝素的间接竞争酶免疫测定（IC-ELISA）方法。【方法】采用酯化反应合成川楝素的半抗原并经HRMS,NMR及IR鉴定;用混合酸酐法和活化酯法分别合成人工免疫抗原与包被抗原;通过免疫动物获得多克隆抗体。【结果】合成了琥珀酸单酰川楝素（TS）和戊二酸单酰川楝素（TG）2种半抗原,与载体蛋白BSA和OVA分别偶联制备了2种免疫原TS-BSA和TG-BSA,及2种包被原TS-OVA和TG-OVA。免疫后获得的2种抗体效价达6.4×104和3.2×105。经4种不同包被原－抗体组合优化,以（TS-Ab,TG-OVA）组合建立的川楝素IC-ELISA检测方法,线性检测范围为0.01～100 µg&#8226;ml-1,检测限达0.03 µg&#8226;ml-1,抑制中浓度为1.52 µg&#8226;ml-1;以（TG-Ab,TG-OVA）组合建立的方法,线性检测范围为0.1～100 µg&#8226;ml-1,检测限达0.11 µg&#8226;ml-1,抑制中浓度为3.49 µg&#8226;ml-1。水样中基于（TS-Ab,TG-OVA）组合的川楝素平均回收率为82.4%～106.0%,精密度为1.1%～14.3%。【结论】通过川楝素半抗原的合理设计,获得了高效价的抗川楝素多克隆抗体,建立了快速有效的川楝素IC-ELISA检测方法。     

恩诺沙星ELISA快速检测方法的建立

采用活酯法合成酶标记半抗原（ENR-HRP），紫外扫描分析和ELISA方法鉴定，结合比为1．6：1。选择ENR-HRP与游离ENR相竞争的模式建立检测ENR残留的ELISA检测方法，其最佳工作条件为：二抗的包被浓度为2μg／mL，抗体工作浓度1：1000，酶标半抗原工作浓度1：500。标准曲线在0．423～1000ng／mL之间线性关系良好，其IC50为33．76ng／mL，回归方程为Y=-0．07769lnx＋0．770801，相关系数r=0．99153，最低检测限0．423ng／mL。单抗对达氟沙星、培氟沙星、麻保沙星有少许交叉，特异性较好。ELISA检测方法批内平均变异系数为5．75％，批间平均变异系数为10．69％，重复性较好。     

溴氰菊酯人工抗原合成及鉴定

 以二溴菊酸和3-[(4-硝基苯)氧基]苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[3-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2,2-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:1和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定2个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法初步测定农药浓度50μg/ml时抑制率达到80%以上,为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础。     

齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清...     

除草剂酶联免疫吸附测定研究进展

酶联免疫分析技术具有方便快速、特异性强、灵敏度高等优点,近年来广泛应用于农药残留检测.本文介绍了酶联免疫分析技术在除草剂残留检测中的应用研究进展,分别介绍了各类除草剂的半抗原合成方法以及抗体的灵敏度,探讨了酶联免疫吸附分析法存在的问题和应用前景.     

毒死蜱多克隆抗体的制备

以三氯硫磷为起始原料,经三步反应合成得到毒死蜱半抗原O-乙基O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)N-(3-羧丙基)硫逐磷酸胺 (简称CHBu),此半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白 (OVA)用碳二亚胺法和混合酸酐法通过偶联反应得到免疫抗原和包被抗原,其结合比分别为 14.6 ∶ 1 和6.2 ∶ 1。用所得的免疫原免疫兔子获得了高效价(抗血清: 2.56×104; 冻干粉: 2.56×106)、高亲和性、特异性好的多克隆抗体。交叉反应试验表明,该抗体与毒死蜱各结构类似物交叉反应率均小于4%;亲和性试验表明,在1~500 ng/mL浓度范围内,抑制率与浓度呈线性关系,线性回归方程为 y=23.503 lg(x)+28.556,r=0.991 9,抑制中浓度I50=8.2 ng/mL,最低检测限为1.0 ng/mL。