鸡胚发育过程中垂体促乳素的表达及其细胞的发育

利用免疫荧光标记方法研究了鸡胚发育过程中垂体促乳素(PRL)细胞的发生。结果表明，在鸡胚发育的第14.5天可观察到有少量PRL免疫荧光阳性细胞散在分布于腺垂体前叶。随着胚龄的增加，垂体PRL细胞的体积逐渐增大。细胞直径从第14.5天的6.83μm增加到第20.5天的11.24μm，胞核直径从4.27μm增加到5.99μm。PRL细胞占腺垂体细胞总数的百分比在胚胎发育的第14.5天为0.86％，第20.5天增加到18.85％，并且分布于整个腺垂体前叶。细胞多呈索状排列或团状分布。研究结果表明。鸡胚垂体催乳素细胞的增殖、分化和对PRL的分泌功能主要发生和建立于胚胎发育后期。     

DNA Methylation Pattern in Pronuclear-Stage Mouse Embryos: Effect of Oocyte Vitrification

This study was conducted to investigate the pattern of DNA methylation in pronuclearstage mouse embryos derived from vitrified-warmed oocytes.Mouse oocytes at metaphase Ⅱ (MⅡ) stage of meiosis were all...     

鳜下丘脑神经元细胞培养

为了建立可行、高效的下丘脑神经元细胞技术,本研究通过分离鳜下丘脑组织,用Ⅰ型胶原酶将组织消化成单细胞悬液,并用完全培养液进行培养,在培养的第3、4、5和6天观察细胞的形态。结果显示,培养第3天时细胞贴壁量少,胞体小并且呈单个分布;在培养第4天,细胞的数量显著增多,且具有典型的神经元的形态,胞体饱满;第5天神经元胞体的融合度进一步增大,突起增长增粗,许多分支互相交错连接而形成密集的神经纤维网络;第6天细胞活性减弱,开始凋亡。使用CCK-8法检测细胞活性,结果显示,在培养第5天,细胞活性最高;采用荧光定量PCR(RT-PCR)法和免疫荧光鉴定法对神经元细胞进行鉴定,经RT-PCR检测发现,培养的下丘脑细胞可以表达神经元特异基因noggin,经免疫荧光鉴定,下丘脑神经元细胞纯度为95.9%。研究表明,通过此培养方法能够获得纯度较高的鳜下丘脑神经元细胞,为进一步在细胞水平研究鳜的摄食与能量代谢相关机理奠定基础。     

口蹄疫病毒vp3-间接免疫荧光诊断方法的建立

口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3为保守区,各血清型间差异不大,因此以其为抗原建立一种快速、有效、操作简便的FMDV自然感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断方法.PCR扩增口蹄疫病毒结构蛋白VP3基因,克隆到杆状病毒表达系统转移载体pFastBacHT-A中,转座DH10感受态细胞,获得阳性克隆.提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,获得含口蹄疫病毒结构蛋白基因VP3基因的重组杆状病毒.以被检测血清为一抗,以FITC标记的兔抗牛IGg为二抗,通过反应条件的优化,建立间接免疫荧光检测方法,并检测血清44份,与EIASA方法符合率为90.9%.     

猪瘟实验室诊断技术

猪瘟(HC)具有高度接触传染性，流行广泛，发病率、死亡率高，危害极大。国际兽疫局(OIC)将之列为A类16种法定传染病之一，我国亦将之列为一类动物传染病。20世纪60年代英国在扑灭HC的过程中就证明大部分HC病例属于温和型或隐性感染；我国在20世纪70年代后期也发现HC的流行形式发生了很大变化。病程由急性变为慢性过程，临床症状由典型     

中华蜜蜂囊状幼虫病病毒非结构蛋白抗体的制备及其应用

应用Gateway重组技术构建CSBV非结构蛋白,RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG)诱导获得RdRp基因原核表达蛋白.以重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备相应的多克隆抗体,Western blot检测表明,该抗体能与RdRp重组蛋白和感病中华蜜蜂幼虫蛋白特异性结合,说明获得的抗体特异性高.利用制备的抗体进行免疫荧光标记,发现其能特异地定位在感病中华蜜蜂血淋巴细胞内.     

几种蚜虫对MDMV传毒效率及其口针中病毒附着位点(VAS)的免疫荧光标记

 本研究在测定了5种蚜虫对玉米矮花叶病毒(MDMV)传播效率的基础上,采用免疫荧光(FITC)标记方法,观察到蚜虫口针中MDMV附着位点(VAS)的存在。结果发现不同蚜虫之间的传毒效率及VAS有一定的差异。其中,以麦二叉蚜(Schizaphis graminum)的传毒效率最高,达66.8%。并且其VAS也最明显,位于口针末端约50μm处。通过试验发现,尽管在VAS存在的情况下,用提纯的不含HC的MDMV进行蚜虫传毒试验,其传毒率为零。只有当HC与MDMV共同存在的情况下才可有效传播。至于蚜虫是如何释放病毒的还不清楚。根据试验结果初步认为,蚜虫对MDMV的传播是一个"识别-吸附-释放"的过程。