德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶研究

[目的]优化德氏乳杆菌保加利亚亚种发酵产亚油酸异构酶工艺。[方法]以亚油酸为诱导物,考察不同因素对德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的影响。[结果]德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶的最佳工艺为：在底物添加量1.5‰、发酵温度37℃、发酵时间35h时,亚油酸异构酶酶活可达21.67U/ml。[结论]以亚油酸为诱导物应用德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶,工艺切实可行。     

5种北方药用植物萜类合酶(IPI)的生物信息学分析

该文利用生物信息学的方法和工具,对5种北方药用植物萜类合酶中异戊烯焦磷酸异构酶(isopentenyl pyrophosphate isomerase,IPI)的理化性质、亲/疏水性、跨膜结构域、二级结构、亚细胞定位等方面进行分析及预测.结果表明:5种北方药用植物IPI蛋白的分子量、等电点、不稳定指数、脂肪指数等理化性质无太大差异;主要表现为亲水性;亚细胞定位大多定位于叶绿体上;磷酸化位点最多的是丝氨酸;二级结构以α-螺旋和不规则卷曲为主;均无信号肽,由此推测IPI是非分泌性蛋白;无跨膜结构域存在;主要有1个功能结构域(NudixHydrolase Superfamily).该研究结果为进一步研究IPI基因的功能以及对于北方药用植物的深入研究、提高药用植物药效以及合理开发利用药用植物资源具有重要意义.     

家蚕丝素固定化葡萄糖异构酶的制备方法及其理化性质

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素 ,分别经物理吸附和戊二醛交联方法制得固定化酶Ⅰ和Ⅱ。每克固定化酶Ⅰ的总活力为 791 0 4U ,活力回收率为 5 2 0 6 % ,活力表现率为 72 2 7% ;每克固定化酶Ⅱ的总活力为 811 39U ,活力回收率为 5 3 6 7% ,活力表现率为 72 97%。蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末 ,经吸附后用戊二醛交联固定了葡萄糖异构酶 ,制成固定化酶Ⅲ。每克固定化酶Ⅲ的总活力为 84 4U ,活力回收率为 5 5 2 7% ,活力表现率为 72 4 2 %。经对固定化酶性质的研究表明 :碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定葡萄糖异构酶 ;最适温度比游离酶升高了 15℃ ;最适pH没有变化 ,有较强的抗蛋白质变性剂 (8mol/L尿素溶液中的活力在 80 %以上 )能力 ;各固定化酶的Km值在 4× 10 -2 ～ 5× 10 -2 mol/L范围内。实验还发现Co2 + 和Mg2 +离子为固定化酶的激活剂 ,Fe3 + 和Ca2 + 离子为抑制剂。     

家蚕微孢子虫核糖-5-磷酸异构酶A基因的克隆及表达特征分析

核糖-5-磷酸异构酶A(ribose 5-phosphate isomerase A,RpiA)是多种生物中普遍存在的一种高度保守的蛋白酶,在磷酸戊糖途径(PPP)中起着核心作用,参与原核生物与真核生物核糖-5-磷酸(R5P)与核酮糖-5-磷酸(Ru5P)之间的可逆异构化反应及植物二氧化碳固定的卡尔文循环。为探索RpiA在家蚕微孢子虫侵染家蚕后能量代谢与物质合成过程中所发挥的作用,通过PCR扩增得到NbRpiA基因的编码区。该开放阅读框全长345 bp,编码114个氨基酸,预测蛋白质的分子质量约为13.145 kD,等电点为7.72,未发现明显已知功能结构域。实时荧光定量PCR检测发现,NbRpiA基因在家蚕微孢子虫感染家蚕后7 d内均有表达:从感染后2 h起,NbRpiA基因的表达水平呈缓慢上升的趋势,第2天达到最高,随后表达水平逐渐降低,从第4天开始表达水平大幅降低,至第7天降至最低。初步推测NbRpiA可能在家蚕微孢子虫孢子发芽及增殖阶段发挥作用。研究结果为了解NbRpiA在家蚕微孢子虫能量代谢与物质合成中的作用提供了初步线索。     

芸薹属查尔酮异构酶基因家族RNA干扰载体的构建

作为类黄酮途径的第二步关键酶,查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)催化四羟基查尔酮成为柚皮素,用于合成各种类黄酮物质,影响多种性状。芸薹属含有多种重要的油料、蔬菜和观赏植物。本研究从甘蓝型油菜克隆了芸薹属CHI基因家族的干扰片段BCHII(761bp),采用NcoⅠ+AatⅡ和BamHⅠ+XbaⅠ双酶切方案分别将其反义片段和正义片段亚克隆到植物RNA干扰(RNAi)平台载体pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成了11674bp的RNAi载体pFGC5941M-BCHII(简称pBCHII),多种PCR检测表明2个片段的插入方向正确,重组载体完整,将其转化根癌农杆菌菌株LBA4404以后获得了工程菌株LBA4404-pBCHII-①。本研究结果将促进研究CHI与芸薹属异花授粉、植株色彩、黄籽和抗逆性等性状的关系和开展相关分子育种。     

竹粉酶解液发酵产γ-聚谷氨酸研究

为探究以竹子为原料生产γ-PGA的工艺,首先将原料经碱法预处理,然后加入木糖异构酶和纤维素酶等复合酶酶解得出竹子糖液,再经枯草芽孢杆菌发酵生产γ-PGA。结果表明,添加木糖异构酶可提高酶解率,单因素试验得出还原糖含量达到3.086%。通过单因素试验和正交试验得到最佳发酵γ-PGA培养基条件为竹糖80 g/L,有机氮源8 g/L,谷氨酸钠80 g/L,NH4Cl 3 g/L,K2HPO4·3H2O 2 g/L,MgSO4·7H2O 0.25 g/L,接种量为2%,培养条件为pH值7.0~7.2,温度37℃,培养时间48 h,产量可达35.31 g/L,纯度达87.5%。以竹子为原料,γ-PGA的产量和纯度较高,产业前景好,木糖异构酶对酶解效率的提高有促进作用。     

Inheritance of pollen color in hazelnut

In contrast to the yellow color of pollen of European hazelnut (Corylus avellana L.) cultivars, an unusual cream color was observed in some seedlings from self-pollination of the Sicilian cultivar ‘Montebello.’ After elimination of accidental outcrosses, the segregation fit a 3 yellow: 1 cream ratio, indicating the possibility of simple genetic control. Two seedlings with cream-colored pollen were backcrossed to their parent ‘Montebello,’ and the progeny segregated 1 yellow: 1 cream for pollen color. When two seedlings with cream-colored pollen were crossed with each other, all of the resulting seedlings had cream-colored pollen. These segregation ratios indicate that pollen color in hazelnut is controlled by a single locus with yellow dominant to cream color. The symbol pc is proposed for this locus. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

Enzyme activity changes during anthocyanin synthesis in ‘Olympia’ grape berries

Anthocyanin synthesis began in the skin of ‘Olympia’ (Vitis labruscana Bailey) grape when the berry growth reached a late stage in the second sigmoid growth-curve. During berry development, shikimate NADP oxidoreductase (SORase, EC.1.1.1.25), phenylalanine ammonia-lyase (PAL, EC.4.3.1.5), and chalcone flavanone isomerase (CHFI, EC.5.5.1.6) were investigated in the skin. These enzyme activities were high during early development of the young berry, but rapidly decreased thereafter, and were activated again when rapid anthocyanin synthesis subsequently occurred. When PAL from the young berry was analyzed by isoelectricfocusing polyacrylamide gel electrophoresis (IEF-PAGE), it showed a single activity band with a pI value of approximately 5.4, whereas PAL from the ripe berry showed two activity bands with pIs of 5.4 and 6.5. Thus, SORase, PAL, and CHFI seem to be involved in anthocyanin accumulation simultaneously, and newly synthesized isozyme of PAL may play a key role in pigment formation in ‘Olympia’ skin. The function of these enzyme activities in young berry is also discussed in this text.     

木糖筛选剂在辣椒遗传转化上的应用

为了缓解转基因食品安全性问题,利用安全的木糖筛选系统,开展了辣椒遗传转化技术研究;设置不同的木糖和蔗糖浓度组合,探讨木糖选择压力,初步确立20/5,25/5(g/L,木糖/蔗糖)两个组合为最适木糖筛选浓度;利用农杆菌介导法将pCAMBIA3301-xylose导入辣椒,开展了辣椒安全标记遗传转化技术研究。     

荔枝果皮中4种酚类代谢酶活性的测定方法

为了改进酚类物质生物合成途径中关键酶酶活性的测定方法,以南方重要常绿果树荔枝 Litchi chinensis 果皮为材料,采用两点法和酶动力法2种酶活性研究方法,结合分光光度法和高效液相色谱法检测产物浓度变化,优化了4种酚类代谢常见酶［包括苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查儿酮异构酶(CHI)、二氢黄酮醇还原酶(DFR)和类黄酮糖基转移酶(UFGT)］的测定方法,指出了酶液的纯化、酶活性的保护以及反应底物的溶解方法等对试验结果的稳定性和可靠性的影响,介绍了试验过程中常遇到的问题和具体的解决方法以及试验过程中的注意事项.应用改进后的方法测定荔枝发育过程中果皮PAL、CHI、DFR和UFGT的酶活性,结果发现活性变化趋势与前人的报道基本一致.改进的PAL、CHI、DFR和UFGT酶活性的测定方法可靠,可为相关的研究提供重要的参考.