硝酸银对葡萄愈伤组织生长及其白藜芦醇含量的影响

以‘黑比诺’葡萄叶柄诱导并继代10个月的愈伤组织为试验材料,通过在培养基中(B5+1.0 mg/L KT)分别添加0、1、5、10、20、30 mg/L不同浓度的AgNO3,研究了AgNO3对愈伤组织生长和白藜芦醇累积的效应,结果表明,除5 mg/L AgNO3外,其他几种浓度处理均对愈伤组织的生长产生抑制作用;添加10 mg/L的AgNO3对愈伤组织中白藜芦醇的累积效果最佳,含量达17.884μg/g,高出对照3.6倍;但AgNO3浓度过高(30 mg/L)时,白藜芦醇含量明显下降;当浓度为5 mg/L时,白藜芦醇的产量最大,为18.878μg/瓶,是对照的4.7倍.     

星点设计–效应面法优化葡萄枝蔓中白藜芦醇的提取工艺

用乙醇回流法从葡萄枝蔓中提取白藜芦醇,以乙醇体积分数(x1)、回流时间(x2)和溶媒比(x3)为自变量,以白藜芦醇得率(y)为因变量,得二次回归方程y=–6.186 39+0.181 78x1–0.012 371x2+0.122 93x3+0.000 273x1x2–0.000 545x1x3–0.000 164x2x3–0.001 178x12–0.000 042x22–0.002 998x32(r=0.936 1,P<0.01)。用星点设计–效应面法优化提取工艺条件,优化后的较佳提取工艺条件为乙醇体积分数90.2%,提取时间129.5 min,溶媒比8.8,共提取2次。     

中国野生葡萄芪合成酶基因融合表达、纯化及多克隆抗体制备

根据中国野生葡萄芪合成酶基因cDNA序列(该序列已申请国家发明专利,申请号:200510041662.4),设计1对PCR引物,以野生种华东葡萄(Vitispseudoreticulata)白河-35-15'RACEcDNA第一链为模板,克隆该目的基因。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化EscherichiacoliBL21,经诱导后表达出约66kD的融合蛋白。该融合蛋白主要以包涵体形式表达,经变性剂溶解、梯度透析,对该包涵体进行复性,复性蛋白通过与GlutathioneSepharose4BFastFlow结合、洗脱,获得了纯化的芪合成酶融合蛋白。以洗涤纯化的包涵体作抗原免疫家兔,制备多克隆抗血清,经Westernblot检测,该抗血清(稀释到1∶3000)与芪合成酶融合蛋白识别反应良好。     

白藜芦醇的生物学功能及其在反刍动物上的应用研究

白藜芦醇是一种天然植物多酚类化合物,具有多种生物学功能。近年来白藜芦醇作为一种功能性饲料添加剂备受关注,但在反刍动物方面的应用研究还较少。本文综述了白藜芦醇的生物学功能及其在反刍动物上的研究现状,并提出后续研究展望,以期为白藜芦醇在反刍动物生产中的推广应用提供参考。     

红葡萄酒中白藜芦醇及其糖苷异构体的反相HPLC分析

用反相HPLC同时测定红葡萄酒中白藜芦醇及糖苷4种异构体。以 OASISTM固相萃取柱进行前处理,以 Hypersil C18(4.6 mm×250mm,5μm)为色谱柱,乙睛-水(含 0.1%三乙胺)梯度洗脱,同时用二极管阵列检测器在288nm和 308nm检测。结果表明:白藜芦醇及其糖苷4种异构体在 20 min内可得到较好的分离,其回收率均在(95.7±1.4)%以上,最小检测限为0.001 mg·L-1。     

中国野生毛葡萄芪合酶基因抗白粉病功能分析

中国野生毛葡萄（Vitis quinquangularis）‘丹凤–2’白藜芦醇含量高，并抗白粉病。以此为材料，利用同源序列克隆技术获得两个芪合酶基因 VqSTS12 和 VqSTS25。以欧洲葡萄‘无核白’分生愈伤组织为受体材料，通过农杆菌介导法进行遗传转化，分别获得 7 个 VqSTS12 和 5 个 VqSTS25‘无核白’葡萄转基因植株。实时定量 PCR 分析发现，与野生型植株相比，转基因植株中芪合酶基因 STS 与下游白藜芦醇糖基转移酶基因 RSGT 表达量升高，与 STS 有底物竞争关系的查尔酮合酶基因 CHS 表达量降低。STS 的表达产物中主要的芪类物质反式云杉新苷含量增加。选择芪类物质含量高的转基因植株接种白粉菌发现，转基因植株对白粉菌的敏感性降低，发病较晚，病情较轻，在转基因植株上部分孢子萌发受抑制，菌丝发育迟缓。转基因植株中 VqSTS12 和 VqSTS25 受白粉菌诱导表达：在接菌后 1 ~ 3 d 内表达量显著升高，随后略有下降，在 6 ~ 7 d 表达量再次上升。同时高效液相色谱（HPLC）检测到 STS 的表达产物白藜芦醇、云杉新苷、葡萄素与紫檀芪含量增加。研究结果表明‘丹凤–2’毛葡萄拥有的 VqSTS12 和VqSTS25 及其表达的芪类物质具有抑制白粉菌的作用。     

白藜芦醇对不同类型底物甲烷产生、养分降解及微生物区系的影响

本试验研究了白藜芦醇（RES）对两种类型底物瘤胃发酵的甲烷（CH₄）排放、养分降解以及微生物区系影响，旨在探索RES调控瘤胃发酵、降低CH₄排放的机理。本试验为双因素设计，选取3只健康、体重相近（（50±2.3） kg）且安装有永久性瘤胃瘘管的杜寒杂交肉羊做为瘤胃液供体。试验一，在精粗比为68：32（高精料，HC）和28：72（高粗料，HF）的两种底物中分别添加0%（对照组）、7.7%、14.3%和25.0%的RES进行产气试验，并选取对照组和14.3%组进行16S扩增子高通量测序；试验二，在上述两种底物中分别添加0%、14.3%的RES进行降解率试验。以上试验处理均设置5个重复。试验结果如下：1）两种底物产气量（GP）和CH₄产量随RES水平的增加均线性降低（P<0.05）；在相同RES处理下，相较HC，HF中GP和CH₄产量均显著降低（P<0.05）；且两因素对两指标变化存在交互效应（P<0.05）。2）添加RES后两种底物干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）降解率均显著降低（P<0.05）；在相同RES处理下，相较HC，HF中各养分降解率均显著降低（P<0.05），且两因素对发酵24 h中性洗涤纤维降解率（NDFD）和酸性洗涤纤维降解率（ADFD）存在交互作用（P<0.05）。3）从门水平来看，两种底物中添加RES均引起变形菌门（Proteobacteria）丰度显著升高（P<0.05）；相较HC，HF的变形菌门丰度显著升高（P<0.05）。另外，在发酵第24小时，HF中添加RES添加导致互养菌门显著降低（P<0.05）；发酵第12小时，同一RES处理水平下，相较HC，HF中放线菌门丰度显著降低。从属水平来看，添加RES和改变底物类型均导致Prevotella_1（普雷沃氏菌_1）丰度大幅下降，且在HC （发酵12 h）、HF （发酵24 h）具有统计学意义（P<0.05）；添加RES变形菌门的优势菌属Ruminobacter和Succinivibrio均显著增加（P<0.05）。另外，发酵第12小时，在HF添加RES，Rikenellaceae_RC9_gut_group、Prevotellaceae_NK3B31_group和Christensenellaceae_R-7_group丰度均显著上升（P<0.05）；相较HC，HF中Prevotellaceae_UCG-001、Prevotellaceae_NK3B31_group和Christensenellaceae_R-7_group丰度显著降低（P<0.05）。在发酵第24小时，在HF中添加RES 导致Veillonellaceae_UCG-001和Lachnospiraceae_XPB1014_group丰度显著降低（P<0.05），Prevotellaceae_UCG-001、Phocaeicola、Prevotellaceae_NK3B31_group、Succiniclasticum、Christensenellaceae_R-7_group、Ruminococcaceae_NK4A214_group和Ruminobacter丰度显著升高（P<0.05）；且两因素对普雷沃氏菌_1、Succiniclasticum、Veillonellaceae_UCG-001和Lachnospiraceae_XPB1014_group的丰度变化存在互作效应（P<0.05）。此结果说明，添加高水平的RES可以有效降低瘤胃环境CH₄的排放量，但是抑制了各养分在瘤胃中的降解，这可能与瘤胃菌群中普雷沃氏菌_1的大幅度下降有关。     

山葡萄发酵酿酒皮渣中原花青素、白藜芦醇和葡萄籽油含量测定分析

对山葡萄生产主栽品种“双红”、“左优红”、“北冰红”和品系“2001-1-135”发酵酿酒废皮渣中的原花青素、籽油、白藜芦醇含量测定分析.结果表明:原花青素含量平均9.5 mg/g,其中“双红”品种最高,达12.39 mg/g;籽油含量平均13.4％,以品系“2001-1-135”最高,质量分数为16.4％；白藜芦醇总含量平均59.25 μg/g,以“双红”最高,可达103 μg/g.测试分析表明,山葡萄酿酒皮渣原花青、籽油、白藜芦醇含量较高,进一步开发综合利用潜力较大.     

培养基成分对葡萄愈伤组织生长和白藜芦醇含量的影响

以巨峰葡萄果皮愈伤组织为试材,利用不同成分的B5继代培养基对其进行诱导,测定愈伤组织生长量及白藜芦醇含量。结果表明:5%蔗糖有利于愈伤组织的生长及白藜芦醇含量的积累;NO3-/NH4+比例过高或过低均不利于愈伤组织的生长及白藜芦醇含量的积累,二者比例为2∶1时效果最佳;添加5 mg/L NAA与0.7 mg/L6-BA有利于愈伤组织的生长及白藜芦醇含量的积累。在最适宜培养基条件下,愈伤组织的生长量为56.12 g/L,白藜芦醇为464.520μg/g,白藜芦醇总含量为23.312 mg/L。白藜芦醇的含量和产量分别是对照的2.6倍和2.9倍。